B103-V3-One-Tube Cloning Kit,无缝克隆（同源重组）,新贝生物,NovaBio,新贝（上海）生物科技有限公司,免费技术咨询,专注分子生物学工具酶和服务.pdf

NovaBio Topo Cloning Mix 货 号：B103 保存条件：- 20 ℃ 产品介绍： 本品含有Topoisomerase 、含有自杀基因ccdB的载体，配合优化Buffer，能实现室温5 min完成高效连接。含有的自杀基 因，当片段与载体连接会破坏ccdB的表达使得细胞能正常生长，反之则不能生长，实现零背景。添加的平端化酶，使得 本品可以兼容TA克隆和平末端克隆。 产品组成： 组分 B103-01(20) 5 × Topo Cloning Mix* 20 μL *含Topoisomerase和Topo载体（Kana、Amp双抗性，ccdB 自杀基因） 产品特点： 易·组分预混； 快·5分钟完成连接； 广·平端克隆，TA克隆均可兼容； 产品使用： A.获得目的片段 引物5’端不含有磷酸基团; 使用Taq酶或者高保真酶扩增均可; 割胶回收最佳; Version1.3 本品仅供科研使用，不能用于人和动物医疗诊断 Page 1/2 B.连接体系 5 × Topo Cloning Mix冰上解冻后混匀备用，在冰上依次加入以下组分： 5 × Topo Cloning Mix 1 μL 纯化回收产物 1 - 4 μL※ 2 ddH O 补足至 5 μL ※ 纯化回收产物最适使用量= [0.05 × 长度] ng 移液器轻柔混匀，室温（25℃ - 37 ℃）反应5 min ，之后放置冰上备用。 C.连接产物转化 （使用化学感受态可参照以下步骤，或以使用的感受态说明书为准） C.1 在冰上解冻克隆感受态细胞,取10 μl重组产物加入到100 μl感受态细胞中，轻弹管壁混匀，冰上静置30 min。 C.2 42℃水浴热激45秒，立即冰上冷却2-3分钟。加900 μl SOC或LB培养基(不添加抗生素)，37℃摇菌1小时(转速200 - 250 rpm) 。 C.3 将相应抗性的LB平板固体培养基在37℃培养箱中预热。5,000 rpm离心5 min ，弃掉900 μl上清。用剩余培养基将菌体重悬，用无 菌涂布棒在含有正确抗性的平板上轻轻涂匀。 C.4 37℃培养箱中倒置培养12-16 h。 D.克隆鉴定 PCR鉴定/酶切鉴定/测序 E.附载体信息 Version1.3 本品仅供科研使用，不能用于人和动物医疗诊断 Page 2/2