ELISA实验、酶标仪、洗板机的原理和使用教学文稿.ppt

ELISA实验、酶标仪、洗板机的原理和使用;酶标（ELISA）;1.　ELISA的原理 2.　ELISA的类型 3.　试剂准备：免疫吸附剂 结合物 酶底物的准备 4.　对照设定 5.　标本的采取和保存 6.　结果判断 ;ELISA是一种免疫测定。 基础:抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，由此进行定性或定量分析。;ELISA技术原理;1.1　抗原抗体反应 ;1.1.2　特异性 ;1.1.3　最适比例 ;1.1.4　敏感性;2　ELISA的类型;双抗体夹心法测抗原;双抗原夹心法测抗体;3. ELISA的试剂(A、B、C三部分);3.1 ELISA的试剂准备 A ;3.2 ELISA的试剂准备 B ;酶 纯度高，催化反应的转化率高，专一性强，性质稳定，来源丰富，价格不贵，受检标本中不存在相同的酶。 酶结合物保留活性部分和催化能力，底物易于制备和保存，价格低廉，有色产物易于测定等。 在ELISA中，HRP（辣根过氧化物酶），AP（碱性磷酸酶），葡萄糖氧化酶，β-D-半乳糖苷酶和脲酶等。 HRP是一种糖蛋白，含糖量约为18%，分子量为44000，是一种复合酶，由主酶（酶蛋白）和辅基（亚铁血红素）结合而成，是一种卟啉蛋白质。;3.3 试剂准备 C 酶的底物; AP的底物为磷酸酯酶，一般采用对硝基苯磷酸酯作为底物。产物为黄色的对硝基酚，在405nm波长处有吸收峰。用NaOH终止酶反应后，黄色可稳定一时间。AP也有发荧光底物（磷酸4-甲基伞酮），可用于ELISA作荧光测定，敏感度较高于用显色底物的比色法。;3.4 对照设定 ;　参考标准品;酶标基本步骤;;加样;温育;洗涤;洗板机;洗板机使用注意事项;洗板机的应用范围;显色;酶标仪;酶标仪的检测原理;酶标仪配件;酶标仪配件;MD 公司：业界老大，产品质量过硬，做工精细。但对中国支持服务较差、管理混乱。 Bio－Tek 公司：与MD公司伯仲之间，产品质量过硬，做工精细。进入中国市场十多年，市场占有率高，服务较好。 PE公司：著名的分析仪器生产商，但酶标产品单一、简单，后续支持不足。 Tecan 公司: 著名的液体分装设备生产商，高端产品较好，底端产品较差。;Bio-tek ELx800 酶标仪的使用 ;3、上机操作 开机 → ???器自检 → 进入主菜单MainMenu → 按READ功能键 → 选择要做项目的编号及名称→输入要做的样本数量→ 按ENTER 键 → 把检测板放入机器运载台上 →打印机打印出结果（打印机要打开并放好纸）→取走检测板，按ENTER键→ 选择要做项目的编号及名称 →按MainMenu键，进入主菜单MainMenu → 操作结束;酶标仪的使用注意事项;ELISA的操作要点;谢 谢！