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ELISA实验、酶标仪、洗板机的原理和使用;酶标(ELISA);1. ELISA的原理
2. ELISA的类型
3. 试剂准备:免疫吸附剂
结合物
酶底物的准备
4. 对照设定
5. 标本的采取和保存
6. 结果判断 ;ELISA是一种免疫测定。
基础:抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,由此进行定性或定量分析。;ELISA技术原理;1.1 抗原抗体反应 ;1.1.2 特异性 ;1.1.3 最适比例 ;1.1.4 敏感性;2 ELISA的类型;双抗体夹心法测抗原;双抗原夹心法测抗体;3. ELISA的试剂(A、B、C三部分);3.1 ELISA的试剂准备 A ;3.2 ELISA的试剂准备 B ;酶
纯度高,催化反应的转化率高,专一性强,性质稳定,来源丰富,价格不贵,受检标本中不存在相同的酶。
酶结合物保留活性部分和催化能力,底物易于制备和保存,价格低廉,有色产物易于测定等。
在ELISA中,HRP(辣根过氧化物酶),AP(碱性磷酸酶),葡萄糖氧化酶,β-D-半乳糖苷酶和脲酶等。
HRP是一种糖蛋白,含糖量约为18%,分子量为44000,是一种复合酶,由主酶(酶蛋白)和辅基(亚铁血红素)结合而成,是一种卟啉蛋白质。;3.3 试剂准备 C 酶的底物; AP的底物为磷酸酯酶,一般采用对硝基苯磷酸酯作为底物。产物为黄色的对硝基酚,在405nm波长处有吸收峰。用NaOH终止酶反应后,黄色可稳定一时间。AP也有发荧光底物(磷酸4-甲基伞酮),可用于ELISA作荧光测定,敏感度较高于用显色底物的比色法。;3.4 对照设定 ; 参考标准品;酶标基本步骤;;加样;温育;洗涤;洗板机;洗板机使用注意事项;洗板机的应用范围;显色;酶标仪;酶标仪的检测原理;酶标仪配件;酶标仪配件;MD 公司:业界老大,产品质量过硬,做工精细。但对中国支持服务较差、管理混乱。
Bio-Tek 公司:与MD公司伯仲之间,产品质量过硬,做工精细。进入中国市场十多年,市场占有率高,服务较好。
PE公司:著名的分析仪器生产商,但酶标产品单一、简单,后续支持不足。
Tecan 公司: 著名的液体分装设备生产商,高端产品较好,底端产品较差。;Bio-tek ELx800 酶标仪的使用 ;3、上机操作
开机 → ???器自检 → 进入主菜单MainMenu → 按READ功能键 → 选择要做项目的编号及名称→输入要做的样本数量→ 按ENTER 键 → 把检测板放入机器运载台上 →打印机打印出结果(打印机要打开并放好纸)→取走检测板,按ENTER键→ 选择要做项目的编号及名称 →按MainMenu键,进入主菜单MainMenu → 操作结束;酶标仪的使用注意事项;ELISA的操作要点;谢 谢!
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