标准曲线法测定芦丁含量.docVIP

实验三十六 标准曲线法测定芦丁含量 一、目的要求 1．掌握标准曲线制备的方法。 2．掌握标准曲线法测定药物成分的方法。 二、实验原理 显色反应需要具备良好的重现性与灵敏性，因此必须控制反应的条件，主要是溶剂种类、试剂用量、溶液酸碱度、反应时间和显色时问等。芦丁为黄酮苷，能与??Al3+生成黄色配合物，在NaNO2的碱性溶液中呈红色，在510nm波长处有最大吸收。据此显色反应用光度法测定芦丁含量，应注意控制反应时间、显色时间以及试剂用量等条件。 显色法的定量方法可采用标准曲线法。 三、仪器与试剂 1．仪器紫外-可见分光光度计；量瓶、移液管、吸量管。 2．试剂亚硝酸钠，硝酸铝，氢氧化钠，乙醇(均为分析纯)，5％亚硝酸钠溶液，10％硝酸铝溶液，1mol／L氢氧化钠溶液，30％乙醇溶液，芦丁对照品，芦丁(原料药)。 四、实验内容与步骤 1．对照品溶液的制备精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品100mg，置100mL量瓶中，加甲醇70mL，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀。精密吸取10mL，置100mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得(每1mL中含无水芦丁0．1mg)。 2．标准曲线的制备精密量取对照品溶液(o．1mg／ml)o．0mL、1．0mL、2．0mL、3．0mL、4．0mL、5．0mL，分别置于10mL量瓶中，各加30％乙醇使成5．0mL，各精密加入5％亚硝酸钠溶液0．3mL，充分摇匀，放置6分钟。各精密加入10％硝酸铝溶液0．3mL，充分摇匀，放置6分钟。各加1lmol／L氢氧化钠溶液4．0mL，用蒸馏水稀释至刻度，充分摇匀，放置15分钟，用分光光度计，在510nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。 3．试样测定精密量取芦丁试样溶液(0．1mg／ml)3.0mL，置10mL量瓶中，按标准曲线制备项下自“各加30％乙醇使成5．0ml。“起依法操作直至测定出样品的吸光度。 五、注意事项 1．加入各种试剂的顺序应按操作方法进行。 2．本显色反应为配位反应，反应速度较慢，故每加入一种试剂后应充分振摇，以利反应完全。 六、数据处理 1．根据测得的对照品的数据，绘制A—C标准曲线或计算回归方程。 2．根据测得的试样的数据，从标准曲线上读出或由回归方程计算出试样溶液中芦丁的重量(rag)，按下式计算： 参考文献： 黄世德，梁生旺主编. 分析化学实验 北京市：中国中医药出版社，2005