药品检验用菌种的传代和保藏培训教材.ppt

冻结真空干燥保藏法 历史悠久，又称冻干法 不产生孢子只产生菌丝体的丝状真菌不宜采用该法 适用面广 保藏时间可达10年以上 多为菌种保藏机构采用 冻结真空干燥保藏法 密封性好，可避免保藏期间的污染 保藏容器体积小，方便携带和贮藏 保藏时间更长，变异概率更低 普通微生物实验室适用的保藏技术 琼脂斜面低温保藏法 液体石蜡保藏法 低温冷冻保藏法 甘油冷冻保藏法 琼脂斜面低温保藏法 细菌置4～6℃保藏，芽孢杆菌每3～6个月移植一次，其他细菌每月移植一次。 放线菌于4～6℃保藏，每3个月移植一次。 酵母菌于4～6℃保藏，每4～6个月移植一次。 丝状真菌于4～6℃保藏，每4个月移植一次。 担子菌于4～6℃保藏，每3个月移植一次。 保藏的湿度通常在50％～70％为宜。 菌种保藏的一般规定 1、菌种“代”的确定：2005版药典规定，以干燥菌种管为第“0”代，由此得到的第一批子代为第一代，以此类推。 2、菌种传代次数规定：2005版药典规定不超过5代。 3、菌种应专人保藏、专柜贮藏，认真做好登记，统一编号，按期传代，并做好有关检验记录。 4、保存菌种传代或冻干均应填写专用记录，菌种管上应有标签，表明菌种编号、代次、批号、日期。 5、过期菌种应及时处理、登记，经121 ℃30分钟灭菌消毒。 实验室菌种传代操作步骤 1、接种前用1：1000新洁尔灭擦拭工作台面，然后开紫外灯消毒30分钟。 2、自冰箱取出保存工作用菌种，室温放置20分钟；温度平衡后才能传代。 3、实验人员进入缓冲间，换鞋、穿无菌衣、戴口罩，用1：1000新洁尔灭溶液消毒双手，并将培养基及菌种移入阳性菌接种室。 4、点燃酒精灯，将菌种管塞子，通过火焰转动使稍稍松动，以免接种时粘着打不开。 5、接种操作：左手拿住菌种管，将管口靠近火焰旁，右手拿接种棒，将白金耳烧红约30秒，杆部通过火焰灭菌。挑取少量菌苔；另取，照上述方法在火焰旁打开塞子，将白金耳伸入管内斜面培养基的底部，从下到上将白金耳轻贴斜面培养基的表面作曲折移动。 5、接种后，将斜面置规定温度、时间培养。取出观察，菌种生长良好，换橡皮塞，贴上标签，放入冰箱保存。 6、细菌一个月传代一次，枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉可三个月传代一次。 菌种管理 1、标准菌种必须从认可的菌种收集途经获得；实验室必须建立和保存所有菌种的收集、贮藏、保存、确认试验的记录。 2、实验室应有文件管理标准菌种（从原始菌种到工作用菌种）。该程序应包括： a:标准菌种必须定期传代，并做确认试验，包括实验室在所需要关键诊断指标，实验室必须记录并保存。 b：每一子菌种都应以适当标签、标记来表示名称、标准号、接种日期和传代日期。 C:每一子菌种都应以标记从原始菌种传代到工作用菌种的代数；记录菌种生长的培养基及培养条件；菌种生存条件等。 过期菌种处理 过期菌种应及时清理、登记，并经121 ℃、30分钟高压消毒灭菌。 例1：金黄色葡萄球菌传代保藏技术 1、购置金黄色葡萄球菌（如我所提供的菌种为第二代菌种），假定购置日期为5月21日。 2、准备10支营养琼脂斜面，其中2支用于保藏，其余8支用于当月实验。 3、于5月22日打开菌种管，接种菌种至上述10支斜面，35 ℃培养16～18小时。 4、将10支第三代菌种管做好标签，置适宜温度保藏。 5、5月22日至6月22日，可以使用上述第三代菌种管。 6、至6月22日，重复步骤2，得第四代菌种管。 7、至8月22日前，重新购置原种管。 * * 药品微生物检验用菌种的传代和保藏 浙江省药品检验所 叶铭龙 菌种的定义及其与各应用领域的关系 菌种泛指从自然界获取的各种微生物的不同的种。 医学领域研究菌种主要考虑其致病机理 工业生产研究菌种主要考虑其发酵机理 药品微生物检验主要考虑其标准性 标准菌种的概念及其管理 标准菌种是指由国家授权机构制备的具有稳定的生物学特性并用妥善方法保藏的菌种。 我国的标准菌种统一由中国菌种保藏管理委员会（CCCCM）管理，涉及药品微生物检验的菌种由医学微生物菌种保藏管理中心（CMCC）提供 纯培养 所谓微生物的纯培养是指在一个微生物的菌落形成单位中，所有的微生物细胞或孢子都属于生物学的同一个种。严格地说，纯培养是在培养基上由一个细胞或孢子分裂、繁殖而产生的后代。在该细胞或孢子的生长过程种，不受其他微生物的侵犯，不会在培养物中产生另外微生物种的后代，在整个生长过程中不发生变异或死亡。 获取纯培养的工作环境 1、洁净工作室：环境洁净度10000级下的局部100级的单向流空气区域内，全过程必须无菌操作，防止微生物污染。 2、无菌隔离舱 获取纯培养的接种工具 1、接种环 2、接种针 3、接种铲 4、接种钩 5、其他玻璃器械 获取纯培养的其他器具 1、玻璃器