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DB 37/T ××××—××××
PAGE 4
ICS FORMTEXT 65.020.30
FORMTEXT B41
FORMTEXT
DB FORMTEXT 37
FORMTEXT 山东省地方标准
DB FORMTEXT 37/T FORMTEXT ××××— FORMTEXT 2020
FORMTEXT
FORMTEXT Ⅰ群禽腺病毒感染诊断技术 第3部分:血清4型Ⅰ群禽腺病毒感染间接ELISA诊断技术
FORMTEXT Diagnostic techniques for fowl adenovirus group Ⅰ infection Part 3:An indirect ELISA for detection of antibody against fowl adenovirus group Ⅰ serotype 4
FORMTEXT 2020- FORMTEXT ××- FORMTEXT ××发布
FORMTEXT 2020- FORMTEXT ××- FORMTEXT ××实施
FORMTEXT 山东省市场监督管理局 发布
DB 37/T ××××—2020
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前??言
本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。
本标准由山东省畜牧兽医局提出并组织实施。
本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。
本标准起草单位:山东农业大学。
本标准主要起草人:刁有祥、唐熠、杨晶、王鸿志、陈浩、冯强、张吉、宋存鑫、李伟。
Ⅰ群禽腺病毒感染诊断技术 第3部分:血清4型Ⅰ
范围
本标准规定了间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测鸡血清4型Ⅰ群禽腺病毒抗体的技术规范。
本标准所规定间接酶联免疫吸附试验(ELISA)适用于鸡血清4型Ⅰ群禽腺病毒感染抗体的特异性检验。
规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
GB 19489 实验室生物安全通用要求
GB/T 27401 实验室质量控制规范动物检疫
术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
血清4型Ⅰ群禽腺病毒 Fowl adenovirus group Ⅰ Serotype 4
是引起鸡心包积水-肝炎综合征的病原,主要造成3周龄~5周龄鸡突然死亡,并伴随有心包积水和肝炎。
一抗 Primary antibodies
第一抗体就是能和特异性抗原特异性结合的蛋白。本标准的一抗为经离心后分离后鸡的血清待检样品。
酶标二抗 HRP-labeled secondary antibodies
二抗是利用抗体是大分子的蛋白质具有抗原性的性质,去免疫异种动物,由异种动物的免疫系统产生的针对于此抗体的免疫球蛋白,同时用辣根过氧化物酶进行标记的抗体。本标准中的酶标二抗为兔抗鸡辣根过氧化物酶标记的IgG,其效价应在1:32以上。
血清标准品
SPF鸡接种血清4型Ⅰ群禽腺病毒经PCR检测为阳性后,制备的血清为阳性血清;SPF鸡的血清作为标准阴性血清,PCR检测结果为阴性。
实验室要求
环境
实验室符合GB 19489和GB/T 27401要求,实验室必须为生物安全Ⅱ级(BSL-2级)及以上实验室。
生物样品应严格控制对环境的污染,试验结束后应将相关样品(血液)收集高压灭菌后,送有资质的医用垃圾处理公司做最终处理。
人员
操作人员应接受实验室生物安全、实验室质量管理和血清学实验室检测技术培训。熟悉生物样品处理以及熟悉间接ELISA检测结果的判断方法。
仪器设备
台式高速离心机(最大转速为15000 rpm)。
酶标仪。
微量移液器:最大量程分别为10 μL、20 μL、100 μL、1000 μL。
聚苯乙烯板。
水平振荡器。
恒温培养箱。
试剂或材料
除另有规定外,所有生化试剂均为分析纯,水符合GB/T 6682规定的一级水。
阳性血清,SPF鸡接种血清4型I群禽腺病毒经PCR检测为阳性后,制备的血清。
阴性血清,SPF鸡血清,PCR检测结果应为阴性。
血清4型I群禽腺病毒抗原:经浓缩纯化灭活后的全病毒,浓度为4.68 mg/mL。
酶标二抗:兔抗鸡辣根过氧化物酶标记的IgG,效价应在1:32以上。
磷酸盐缓冲液(PBS),见附录A.1。
包被液,见附录A.2。
洗涤液,见附录A.3。
样品稀释液(封闭液),见附录A.4。
底物溶液,TMB底物显色液。
终止液(浓度为2M),见附录A.5。
样品
样品的准备与处理
待检禽血清样品,每份不少于200 μL,无溶血。
用样品稀释液4.4.8将被检血清样品稀释10倍(1:10,如10 μL血清加入90 μL稀释液中)。注意
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