课件液相色谱实例分析.ppt

峰形问题 死体积太大 柱子被污染或堵塞 色谱柱塌陷 流动相缓冲不足或不合适 样品溶剂选择不当，与流动相之间极性差异太大 样品过载（浓度或体积） 柱温过低 丁醛肟威 草肟威 呋喃丹 CPMC 残杀威 （PHC，Arprocarb） 苯噁威 二甲杀威 （MPMC） 乙硫甲威 灭定威 甲萘威 （NAC） XMC 苯氧丁威 （BPMC） 甲硫威 （Mercaptodimethur） 异丙威 （MIPC） 乙肟威 甲氧威 （MTMC） 氨基甲酸酯类农药结构 N-甲基氨基甲酸酯的HPLC分析方法流程图 1、脱气装置 10、反应试剂输液机构 2、低压梯度装置 11、混合装置 3、流动相输液机构 12、荧光检测器 4、梯度混合器 13、阻尼盘管 5、自动进样器 14、反应盘管 6、柱温箱 15、反应盘管 7、分析柱 M1，M2：流动相 8、化学反应箱 R1，R2：反应试剂液 9、脱气装置 N-甲基氨基甲酸酯的HPLC 分析方法 N-氨基甲酸甲酯类农药的基本化学结构式 它们的化合物在碱的条件下加水分解生成甲胺。这里生成的甲胺与一级胺的荧化衍生化试剂O-苯二甲醛（OPA）反应，可进行较高灵敏度的荧光检测。 氨基甲酸酯前处理过程 8成分的N-氨基甲酸甲酯类农药标准试样同时分析的色谱图 1994年6月9日官报上登载的成分的分析例 16成分的N-氨基甲酸甲酯类农药标准试样同时分析的色谱图 甲硫威及其代谢物 甲硫威代谢物高灵敏度分析例 （例如在橘子汁中不得含50ppb以上） 甲硫威的检测限（S/N=3）为2ppb 离子色谱 离子色谱 过渡金属分析系统 CN- 离子分析系统 氨基酸分析系统 氨基酸分析系统 NH2 R C COOH H 氨基酸衍生化方法 柱后衍生 柱前衍生 氨基酸 衍生化后的氨基酸 试剂 色谱柱 检测器 色谱柱 检测器 氨基酸 试剂 色谱柱 检测器 柱后衍生 色谱柱 : 阳离子交换柱 试剂 : 茚三酮方法 --- UV/VIS 检测器 OPA方法 --- 荧光检测器 氨基酸衍生化 色谱柱 检察器 柱前衍生 异硫氰酸苯脂（PITC） Column : Revered Phase Column (ODS) Reagent : OPA (Fluorescence) FMOC (Fluorescence) Fluorescamine (Fluorescence) DANS-Cl (Fluorescence) PITC (UV) 柱前衍生步骤 1. 200uL样品中加入100mM异硫氰酸苯酯 （乙腈溶液）100uL和1M三乙胺（乙腈溶液） 100uL,室温下放置反应1小时 2. 反应液中加入400uL己烷 3. 放置，取下层溶液用一次性滤膜过滤器 （0 .45um ）过滤 4. 取滤液4uL注入 液相色谱常见问题及故障排除经验 液相系统维护流程图 吸滤头 单向阀 柱塞密封圈 线路过滤器 手动进样器 检测器 色谱柱 等度系统 储液瓶 脱气机 泵单元 手动进样器 色谱柱 检测器 废液瓶 1 2 3 4 5 6 7 储液瓶 脱气机 泵单元 自动进样器 色谱柱 检测器 废液瓶 低压梯度单元 混合器 低压梯度系统 1 2 3 4 5 6 7 8 9 储液瓶 脱气机 泵单元 自动进样器 色谱柱 检测器 废液瓶 混合器 高压梯度系统 1 2 3 4 5 6 7 8 液相色谱故障排除经验 故障的确定 —至少要重复出现两次以上 初步判断故障引起的原因 —方法或硬件 由经验或平时的积累确定故障原因 —平时做好观察和记录 当不能确认故障原因时 —采用排除法逐一考察可能引起故障的因素 确定故障能否自行处理 —不要贸然拆卸不熟悉的部件 常见故障因素 仪器环境： —实验室的温度、湿度、酸度等 —实验室震动、灰尘等问题 —电源及地线问题 使用条件： —流动相（pH值、均匀度、气泡等） —样品（样品分解、氧化、样品溶剂等） —色谱柱（污染、堵塞、塌陷等） 硬件问题： —输液泵 —进样器 —检测器 平常保养 -做好平常的保养可以有效的降低故障的发生率 -做好平常的保养可以延长仪器的使用寿命 常做的保养 —保证仪器的使用环境（经常清洁仪器，尤其是灰尘） —泵的