免疫检测与防治.ppt

（一）人工主动免疫 1. 定义： 用疫苗接种机体，使之产生 特异性免疫，从而预防感染的措施。 2. 疫苗 ⑴灭活疫苗（死疫苗）与减毒活疫苗 活疫苗 ：人工的方法使病原体 减毒 或从自然界 筛选病原体 无毒株 或 微毒株 所制成的 活的 微生 物制剂。也称减毒活疫苗，卡介苗，甲肝疫苗。 死疫苗 ：选用 免疫原性强 的病原微生物，经人 工 大量培养，经理化方法将其 杀死 后制成的疫苗。 无毒力 ，但仍保持其 免疫原性 。伤寒、百日咳、 钩端螺旋体、斑疹伤寒、乙型脑炎等疫苗 死疫苗与活疫苗特点的比较 第 11 讲 免疫学检测技术 的基本原理 免疫学检测方法： 依据 免疫学理论 设计的 测定 抗原、抗体、免疫细胞及细胞因子 的 实验方法。 一、基本原理 抗原与相应抗体特异性结合，并呈现 某种反应现象，如凝集或沉淀，以此检测 抗原或抗体。 第一节 体外抗原抗体结合反应 的特点及其影响因素 ㈠抗原抗体反应的特点 1. 抗原抗体结合的特异性 抗原抗体结合除 空间构型 互补外，还以 氢键 、 静电引力 、范 德华力 和 疏水键 等非共价方式 结合， 一定条件下 复合物可 解离 成游离状态， 且仍 保持原有性质 。 2. 抗原抗体结合的可逆性 复合物 解离度 主要取决于特异性抗体 超变区 与相应 抗原表位 三维空间构型的 互补程度 ， 互补程度越高，分子间距越小，作用力越大， 两者结合越牢固，不易解离；反之，则容易 发生解离。 3. 抗原抗体结合的比例与浓度 抗原与抗体结合 比例合适 ，则可形成 肉眼可见的 大结合物 ；反之形成肉眼 不可见的小结合物。 4. 抗原抗体反应的阶段性 第二阶段： 可见反应阶段。 数分钟、数小时至数日，因素影响多。 第一阶段： 特异结合阶段。 仅几秒到几分钟、尚无可见反应； ㈡抗原抗体反应的主要影响因素 1. 抗原和抗体浓度、比例 2. 电解质 3. 温度 4. 酸碱度 二、血清学反应的种类 1. 凝集反应 细菌、细胞等 颗粒性抗原 与 相应的抗体 ， 或表面 包被抗原 的颗粒状物质与 相应的 抗体 在电解质存在的条件下结合，出现 肉眼可见 的 凝集团 现象。 2. 沉淀反应 毒素、组织浸液以及血清中的蛋白等 可溶性抗原 与 相应抗体 反应后，出现 肉眼可见 的 沉淀物 。 3. 免疫标记技术 用 酶、荧光素、同位素 等物质 标记 抗体或抗原进行抗原抗体反应，检 测 抗原或抗体 的技术。 如免疫酶技术、免疫荧光技术、 放射免疫测定。 第一抗体 抗原 第一抗体 — 抗原 第二抗体 生物酶 第一抗体 — 抗 原 - 第二抗体 显色 第二节 免疫细胞的测定 淋巴细胞是机体内主要的免疫细胞，检测其数量和 功能是了解机体免疫状态的重要手段。 一 、淋巴细胞的分离 常用 ficoll （淋巴细胞分离液）密度梯度离心除去红 细胞、粒细胞而获得外周血单个核细胞（ PBMC ），再 经吸附除去单核细胞而得到淋巴细胞。若要分离 T 细胞 ，可用尼龙毛柱、抗 CD3 单抗、 E 花结试验等分离。 二、免疫细胞细胞的鉴定 根据细胞的某些标志，采用免疫荧光法、磁 珠分离法、流式细胞术等方法可确定细胞不同 类型和比例。 （一） T 细胞功能测定 1. T 细胞增殖试验 植物血凝素（ PHA ）、刀豆蛋白 A （ ConA ）等丝裂原及抗 CD3 单抗等能非特异性激活培 养的 T 细胞，使其转化成淋巴母细胞的试验。 淋巴细胞功能测定 在该增殖过程中，细胞 DNA 、 RNA 、蛋白质的 合成增加，细胞形态改变。也可检测特异性抗原 致敏的 T 细胞。 （ 1 ）氚标记的胸腺嘧啶核苷掺入法：该法灵 敏、可靠，应用广泛，但需特殊仪器（液体闪烁 仪），易有放射性污染。 （ 2 ） MTT 法：该法操作简单，无放射性污染， 但敏感性相对较差。 淋巴细胞功能测定 2. 细胞毒试验： Tc 、 NK 细胞对靶细胞有直接杀伤作用 ，可根据待检效应细胞的性质，选用相应的靶 细胞。