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腺病毒包装技术服务 腺病毒（Adenovirus）是目前最高效可靠的重组病毒表达系统之一，可用于在哺乳细胞中瞬时及高水平地表达shRNA或目的蛋白。其具备以下优点： 1. 宿主范围广。腺病毒可感染一系列哺乳动物细胞，除可感染几乎所有人的细胞类型外，还可感染包括大鼠、小鼠、兔、猪、羊、猴、鸡等物种。 2. 因腺病毒的感染不依赖细胞周期，故其既可以感染增殖细胞也可以感染非增殖细胞。 3. 腺病毒具有嗜上皮细胞特性，因目前大多数肿瘤细胞均属于上皮细胞，这使得腺病毒非常适合应用于基因治疗领域。 4. 病毒滴度高，可用于动物水平的实验。 5. 有较好的生物安全性。腺病毒携带的基因不会整合到宿主细胞基因组中；实验中虽然会有一定机率出现RCA（即复制型腺病毒），但由于大多数成人体内都有针对腺病毒的抗体，所以一般危害不大。 表一 腺病毒表达系统与慢病毒表达系统的比较 病毒表达系统 腺病毒表达系统 慢病毒表达系统 病毒基因组 双链DNA病毒 RNA病毒 复制 自主复制 自主复制 感染细胞类型 感染分裂和不分裂细胞； 嗜上皮细胞 感染分裂和不分裂细胞，适合难转染的原代细胞（如神经细胞）及体内实验 表达方式 瞬时表达 长时间、稳定表达 表达时间 快（1~2天） 慢（1~3天） 表达丰度 高水平表达 中水平表达 滴度 高达1011~1012 pfu/ml 最高可达109~1010 pfu/ml 克隆容量 8~40 kb 8 kb 免疫原性 高免疫原性 低免疫原性 生物安全性 不整合；有一定机率出现RCA；大多数成人有抗体 整合；有一定机率出现RCL 腺病毒表达系统中的难点主要在于怎么将外源基因表达框或者外源的shRNA表达框构建至腺病毒骨架载体上。由于腺病毒骨架载体比较大（~30kb），而且载体中的一些常用酶切位点几乎都有多个，如果用常规的酶切---连接的方式将外源基因或者shRNA表达框构建至腺病毒骨架载体上，成功率很低，因此，目前的腺病毒表达系统基本上都是用同源重组的方法将外源基因或shRNA表达框构建至腺病毒骨架载体上。 本公司的腺病毒表达系统出自Invitrogen公司的BLOCK-iT? Adenoviral RNAi Expression System，与市面上其它腺病毒表达系统往往利用大肠杆菌或者293细胞自身的同源重组系统不同，本公司的腺病毒表达系统采用的是Invitrogen公司的Gateway技术，即利用LR重组酶进行体外重组。与其它腺病毒表达系统相比，这种体外重组更加方便、快速，重组效率更高！ 图1 腺病毒骨架载体pAd/BL-DEST质粒图谱 服务内容： （1）表达shRNA用重组腺病毒包装。 （2）基因过表达用重组腺病毒包装。 服务价格： （1）表达shRNA用重组腺病毒包装，服务价格为5000元/个。如包含有shRNA表达框的穿梭载体客户亦委托本公司构建，其服务价格为1200元/个。 （2）基因过表达用重组腺病毒包装： 目的基因在1.5k以内，服务价格为5000元/个； 目的基因在1.5k~2k，服务价格为5500元/个； 目的基因在2k~2.5k，服务价格为6000元/个。 如需先将目的基因片段构建至穿梭载体上，其实验费用另外计算，具体价格请参见基因克隆服务。 服务承诺： （1）默认情况下本公司提供的病毒量为1ml，滴度≥109pfu/ml（部分病毒可能因其插入片段本身的毒副作用而对重组腺病毒的滴度有所影响）。如需更多量的腺病毒，请联系： yrbio@126.com。 （2）提供详尽、完整的实验报告。 客户须知： （1）腺病毒的感染依赖于细胞表面的柯萨奇-腺病毒受体(CAR)，虽然其可以感染多种宿主及大量的细胞株／系，仍有少量细胞因其表达不带该受体而无法进行有效感染，客户在确定是否采用重组腺病毒之前请先通过阅读文献或是预实验来确定实验的目标基细胞可被腺病毒感染。 （2）本公司目前不提供致癌基因及毒基因等对人体有危害的基因的包装服务。 （3）如客户所需包装的目的基因或shRNA序列片段由客户提供，则客户应提供所要构建腺病毒的目的基因/shRNA的序列及其它相关说明信息。客户应对所提供的材料及信息负责，如因客户提供的材料及信息不准确而引起的实验延误或经济损失由客户承担。 动一动鼠标，敲入一个网址，或者拨打一个电话， 基因研究，其实可以更简单！ ：400-666-9168（免费）/0731-4317068 ：244417087 ： ： yrbio2008@