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第一部分 微生物工程原理 第一、二章 微生物工程概论、生产菌种的来源 SOS生色检测法 ：利用 DNA损伤时，可活化 yecA 蛋白，进而分解噬菌体的阻遏 蛋白，再引起 sifA(sulA)基因启动子启动 LacZ基因的表达，从而达到检测能损伤 DNA 的抗肿瘤药物的目的。 生化诱导分析法 (BIA)：采用测定溶原性λ噬菌体阻遏物支配下的启动子控制的转 录和表达的酶活性的方法。 1、微生物工程的应用领域有 （1）在食品工业的应用 微生物技术最早开发应用的领域， 至今产量和产值仍占微生物工程的首位。 食品 加工、含醇饮料、发酵乳制品、调味品等 （2）在医药卫生中的应用 抗生素、氨基酸、维生素、生物制品、酶抑制剂 （3）在轻工业中的应用 糖酶、蛋白酶、果胶酶、脂肪酶、凝乳酶、氨基酰化酶、甘露聚糖酶等 （4）在化工能源中的应用 醇及溶剂、有机酸、多糖、清洁能源等 （5）在农业中的应用 生物农药、生物除草剂、生物增产剂等 （6）在环境保护中的作用 污水处理（厌气法、好气法） （7）在高技术领域中的应用 基因工程的各种工具酶等 2、抗肿瘤药物产生菌的分离原理 临床上有效的抗肿瘤药物大多是直接作用于核酸或抑制核酸生物合成的物质， 大 部分具有抗菌或抗真菌的活性，现发展出利用微生物筛选作用于 DNA 的抗肿瘤 药物的方法，如生化诱导分析法、 SOS生色检测法 生化诱导分析法 （BIA）：采用测定溶原性λ噬菌体阻遏物支配下的启动子控制的 转录和表达的酶活性的方法。将 lacZ 连接在噬菌体的 PL启动子下，当 DNA 损 伤时，诱发阻遏蛋白 CI 分解， PL启动子启动 lacZ 基因转录，表达出 -半乳糖苷 酶。测定-半乳糖苷酶活性， 可检测能损伤 DNA 的抗肿瘤药物的存在 X-Gal。作显 色底物； 反应后呈蓝色 SOS生色检测法 ：利用 DNA损伤时，可活化 yecA 蛋白，进而分解噬菌体的阻遏 蛋白，再引起 sifA(sulA)基因启动子启动 LacZ基因的表达，从而达到检测能损伤 DNA 的抗肿瘤药物的目的 3、利用 DNA 修复能力突变株进行抗肿瘤药物的筛选原理 生物 --两个以上的 DNA修复基因，一个 DNA 修复基因损伤或变异，仍能存活， 但对能引起 DNA 损伤的化合物十分敏感，易发生死亡 4 、抗病毒药物产生菌的筛选分离方法 （1）作用于核酸的方法 --药物毒性高； （2）小平板测定由病毒引起的细胞变性效果 (CPE)； （3）病毒复制中特有的 DNA 复制酶和核酸合成酶的酶抑制剂 第三章 优良菌种的选育 结构不稳定： 由于重组质粒 DNA 发生缺失、插入或重排引起的质粒结构变化。 分裂不稳定： 由于细胞分裂过程中质粒缺失分配到子细胞中而导致整个质粒丢失 准性生殖： 指真菌不通过有性生殖的基因重组过程。 准性生殖过程包括异核体的 形成、二倍体的形成和体细胞的重组 . 互变异构效应：指四种碱基第六位上的酮基或氨基的瞬间变构， 会引起碱基错配。 多因素低剂量的诱变效应： 指在自然环境中存在低剂量的宇宙射线、 各种短波辐 射、低剂量的诱变物质和微生物自身代谢产生的诱变物质等的作用引起的突变。 自然选育： 不经人工处理，利用微生物的自然突变进行菌种选育的过程 1、提高质粒稳定性的方法 两阶段培养法：一增加菌体、二诱导外源基因表达 适当