分子生物学实验方法大全.doc

实验方法大全 建立一个良好的、具有示范意义的实验室规范是建立一个优秀实验室的最为基本的、必要的、 关键的前题。 正文目录 正文目录 I 表格目录 II 信息准备1 基本鉴定神经活性因子所需项目1 冰冻切片1 cRNA 探针标记 1 PCR Dig Probe Synthesis2 Dig Easy Hyb 杂交方案 2 原位分子杂交(ISH)3 RACE 实验方案5 Northern Blot Dot Blot6 Northern Blot 杂交-mRNA 膜杂交6 随机引物标记 DNA 探针(试剂盒:Promega, U1100)7 DNA 纯化柱制作8 RNA Master Blot 放射性探针杂交检测8 多组织 Northern Blot 放射性探针杂交检测9 细菌培养9 液体细菌培养9 固体细菌培养10 菌种的保存11 感受态细胞的制备和保存11 感受态细胞的制备11 感受态细胞的冻存11 质粒的提取和纯化12 质粒 DNA 的小量提取和纯化 12 限制酶酶切反应12 质粒的酶切，小量酶解反应12 DNA 的重组13 T-载体连接(T/A cloning)13 粘端连接法14 平端连接法15 平-粘端连接法(定向连接反应)15 重组质粒的转化16 重组质粒的鉴定17 α-互补17 插入失活 18 菌落原位杂交18 限制酶酶切分析19 琼脂糖凝胶电泳19 从凝胶中回收 DNA20 PCR 技术20 细胞培养21 无菌操作 21 试剂及材料22 i 细胞的复苏22 培养细胞换液23 培养细胞的传代23 细胞的冻存23 细胞计数 24 细胞转染24 转染质粒的制备24 脂质体转染系统24 新生大鼠皮层神经元分离与培养24 Western Blot(Immunoblotting) 26 蛋白质样品的准备26 细胞胞浆样品准备 26 细胞培养上清样品准备26 细菌培养菌体蛋白样品准备26 SDS凝胶电泳26 SDS凝胶电泳26 SDS凝胶的考马斯亮蓝染色28 SDS凝胶的银染29 SDS-聚丙烯酰胺凝胶的干燥29 转膜 30 免疫反应 30 显 色 31 DAB 显色31 ECL 显色31 表格目录 表格 1、信息准备 ___________________________________________________________________________________ 1 表格 2、RNA 探针标记体系 ___________________________________________________________________________ 1 表格 3、PCR 法 Dig 探针标记体系 _____________________________________________________________________ 2 表格 4、PCR 法 Dig 探针反应参数 _____________________________________________________________________ 2 表格 5、抗体稀释液 __________________________________________________________________________________ 3 表格 6、0.2mol/L NaH2PO4_____________________________________________________________________________ 3 表格 7、0.2mol/L Na2HPO4_____________________________________________________________________________ 3 表格 8、0.2mol/LPB(pH7.2)(Method I)_____________________________________________________________________ 3 表格 9、0.2mol/LPB(pH7.2)(Method II) ____________________________________________________________________ 3 表格 10、RACE 之 PCR 反应体系 ______________________________________________________________________ 6 表格 11 ___________________________________________________