中和试验和ELISA试验比对实验室评价标准 DB37_T 4003—2020 山东.pdfVIP

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2020-06-30 发布于河南
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中和试验和ELISA试验比对实验室评价标准 DB37_T 4003—2020 山东.pdf

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ICS 11.220 B 41 DB37 山东省地方标准 DB37/T 4003—2020 中和试验和ELISA 试验比对实验室评价标准 2020 - 06 - 08 发布 2020 - 07 - 08 实施山东省市场监督管理局发布 DB37/T 4003—2020 前言本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。本标准由青岛海关提出、归口并组织实施。本标准起草单位：青岛海关技术中心。本标准主要起草人：郑小龙、王群、姜帆、徐彪、朱来华。 I DB37/T 4003—2020 中和试验和ELISA 试验比对实验室评价标准 1 范围本标准规定了中和试验和ELISA试验比对实验室评价工作应遵循的基本技术要求。本标准适用于动物检疫、兽医实验室以ELISA试验替代中和试验进行抗体滴度的测定。 2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。《OIE陆生动物诊断试验与疫苗手册》 3 试剂 3.1 培养液：根据不同细胞选择适合的培养液。 3.2 胎牛血清。 3.3 标准毒株、阳性血清、阴性血清。 3.4 敏感细胞系：根据不同病毒选择适合的细胞。 3.5 青霉素。 3.6 链霉素。 3.7 ELISA 试剂盒。 4 器材和设备 4.1 96 孔细胞培养板。 4.2 二氧化碳培养箱。 4.3 普通冰箱和超低温冰箱。 4.4 可调移液器。 4.5 细胞培养瓶。 4.6 酶标仪。 4.7 洗板机。 5 评价总则 5.1 应在最佳条件下进行比对试验，即在同一实验室，由同一批检测人员严格按照标准方法和试剂盒操作要求进行评价。 5.2 对已知阳性血清同时用中和试验和ELISA 试验进行检测，对检测结果进行比对，确定不同抗体滴度对应的ELISA 数值范围。 1 DB37/T 4003—2020 6 实验室评价 6.1 取已知阳性血清样品进行中和试验，测定其抗体滴度。具体操作按照《OIE 陆生动物诊断试验与疫苗手册》进行。 6.2 对已知阳性血清进行稀释，以获得抗体滴度分别为1:2，1:4，1:8，1:16，1:32，1:64……的血清样品。 6.3 将每个滴度的已知阳性血清样品按照ELISA 试剂盒说明书进行检测，测定其OD 值，并根据说明书计算最终数值。 6.4 将已知阳性血清的抗体滴度与ELISA 结果进行比对，确定各滴度的已知阳性血清对应的ELISA 数值的范围，并标定阳性对照血清的抗体滴度。 6.5 根据ELISA 阳性对照血清的数值及每个滴度间ELISA 数值的波动范围，调整每次试验抗体滴度所对应的ELISA 数值范围，以确定未知样品抗体滴度。 _________________________________