生殖毒性PPT参考幻灯片.ppt

结果分析评价 对各项指标的统计分析，对胎儿应以窝为单位；对亲代的资料，以个体或交配对为单位，应考虑受影响的窝的比例；每窝受影响的胎仔的组均百分率，受影响的胎仔总数比例。评价配子成熟，交配行为，孕体着床前的发育、着床。 * 2 对胚胎-胎儿发育影响的研究 目的：检测从着床到硬腭闭合期内对雌性动物持续染毒下，对受孕动物和胚胎、胎儿发育的有害影响。 主要包括致死作用、生长迟缓和结构异常。 * 注意事项 剂量设计与分组：剂量太大，产生的胚胎毒作用大，结果引起较多的死胎、吸收胎，甚至引起母鼠中毒死亡；剂量太小，低于致畸作用的剂量，则又不引起畸形。 一般设3个剂量组，最高剂量组应有轻微母体毒性，最低剂量组不引起明显的毒性效应。 * 试验终末指标 动物处死后，立即从腹中线解剖，称量带胎仔的子宫重，计算第20天孕鼠重减去带胎仔的子宫重，再减去第6天体重后得到孕期增重，在解剖镜下计算黄体数以确定排卵数，仔细观察着床数，活胎、死胎。称量每个胎儿的体重，区别性别，然后从头至脚观察有无畸形。 骨骼检查、内脏检查。 * 结果分析和评价 致畸指数（TI)=雌性动物的LD50/最小致畸计量，表示致畸强度。 致畸指数小于10为基本无致畸危害； 致畸指数大于10为有致畸危害，大于100为强致畸危害。 * 相对致畸指数（RTI):成年动物LD01（最小致死剂量）与诱发5%畸形发生率的剂量之比，比值越大，表示致畸度越高。 * 对围生期的发育及母体功能的影响研究 目的：观察从着床到断奶期间染毒对母体妊娠、分娩、哺乳的影响，和对孕体和幼仔发育的影响。 染毒时间：妊娠第6天到分娩后第20天 出生后观察指标：分娩、哺育、哺乳等情况，子代体重和身长及其生长、发育、出生胎、存活胎、死胎、畸形率、分娩后第21天存活率及功能检测等。 * 试验方法原则 受试动物：性成熟大鼠、小鼠或家兔 剂量分组:一般设立三个剂量组（至少两个剂量组）和一个对照组 染毒途径:动物接触受试物的方法应参照人类实际接触途径 动物数:每组雌雄各16到20只，或雌16到20只，雄8到10只 生殖毒性及其评定 生殖毒性的评价 * 试验方案 : 三代两窝 生殖毒性及其评定 生殖毒性的评价 F３b F３a F１b F２b F２a F１a F０ （断奶或出生８周） 给予受试物８到１２周 第一次交配 第二次交配 观察三个月，喂饲普通饲料，观察其生长发育情况 断乳后给予受试物８到１２周 观察三个月，喂饲普通饲料，观察其生长发育情况 断乳后给予受试物８到１２周 * 两代一窝(和一代一窝)生殖试验 生殖毒性及其评定 F２断奶，检查发育情况 F２出生，每窝留８只幼仔 F１交配 断奶，给予受试物 F１（每窝选留幼仔８只，雌雄各半） 第１６~１９周　雌雄交配 出生第８周给予受试物（F０） 生殖毒性的评价 * 观察指标： 受孕率（％）:反映雌性动物生育能力以及雌性动物受孕情况 正常分娩率（％）:反映雌性动物妊娠过程是否受到影响 幼仔出生存活率（％）:反映雌性动物分娩过程是否正常 幼仔哺育成活率（％）:反映雌性动物授乳哺育幼仔的能力 性别比 生于指数：受孕雌鼠/同笼雌鼠 除上述指标外，还应该注意出生幼仔是否有畸形存在，对死亡的幼仔应进行畸形检查，可为下一步致畸试验提供参考 生殖毒性及其评定 生殖毒性的评价 * 生殖毒性试验的特殊性 毒性表现形式的多样性、延续性和滞后性 动物交配和分娩时间的非同步性 多层次分组（给药组及检测指标亚组） 统计数据的多样性 窝效应和窝大小的不均一性 数据采集、处理和分析的准确可靠性 计算机管理系统 * 动物的分组 交配前计算机分组 交配后计算机自动分组 保证较高的动物交配率和受孕率 人工分组 交配结束前的少量受精鼠 * 动物的临床观察 自备数据库包含实验动物绝大多数的异常行为体征 按发生部位、严重程度和持续时间描述 屏幕提示功能 提高临床观察的准确性和可靠性 * 仔鼠的解剖观察 外观、内脏及骨骼畸形检查项的数据库共存有800 多种实验动物的常见畸形或变异的名称 国际实验动物畸形分类术语为基准 采用三级分类系统作观察和记录 · 外观、内脏及骨骼（1级） · 身体部位（2级） · 脏器、脉管或骨骼（3级） * 生殖毒性试验统计分析的难点 窝效应：同一窝胎鼠的反应比不同窝胎鼠的反应更为相似。 胚胎/胎儿终点分析应以窝为试验单位。以胎儿作为试验单 位就不能考虑窝内相关性，增加Ⅰ类错误的概率，降低实 验的有效性 窝大小差异：每窝的胎鼠数存在较大的差异，以窝为试验 单位不能考虑到窝大小差异。同时，窝大小差异还影响胎 鼠出生时体重