青蒿素分析方法的确定讲解.ppt

分析条件 色谱条件 色谱柱为 RESTEK Pinnacle C18 柱 (150 mm × 2. 1 mm , 5μm) ; 流动相为甲醇 - 水 -10 mmol/L 乙酸胺 ( 80: 10 :10 ) ; 流速 200μl/min ; 柱温 : 室温。 质谱条件 电喷雾 ESI 源 ; 喷雾电压 IS 为 4 000 V; 雾化温度 400 ℃ ; 雾 化气 NEB ( GAS1) 为 12 L· min - 1 ; 加热辅助气 AUX( GAS2) 为 7 L/min ; 帘气 CUR 为 6 L· min - 1 ; 碰撞气 CAD 3L· min - 1 ; 检测方式为 正离子多离子反应监测 (MRM) , 用于定量分析的离子分别为 m/z 302. 3 →m/z 163. 3 (DHA) 和 m/z 300. 2 →m/z 209. 3( 内标 ART) 高液相色谱 - 质谱联用法测定人血浆双氢 青蒿素浓度 [24] 在选定的检测条件下 ,DHA 和内标 ART 生成的基峰离子 为其加 NH 4 + 离子 [M +NH 3 ] + , 将其基峰离子作为母离子进 行产物离子扫描分析 , 得到二者的全扫描及子离子扫描图。 根据 DHA 离子扫描图 , 在选定的检测条件下 , 离子对 mPz 302. 3 →m/z 267. 1 响应明显高于 m/z 302. 3 →mPz 163. 3 , 但该离子对的测定易 受到血浆内源性物质的轻度干扰 , 为定量准确 , 选择离子对 m/z 302. 3 →m/z 163. 3 用于定量分析 , 不受基质效应的影响。 LC-MS/MS 测定血浆双氢青蒿素 (DHA) 的色谱图 A: 空白血浆 B : 空白血浆加 DHA(3. 03 ng· ml - 1) 和内标 1 :DHA 双氢青蒿素 ; 2 : 内标 ART 青蒿素 C: 受试者药后血浆样品加内标 青蒿素分析方法的确定 主讲人：丁晨 青蒿 青篙为菊科一年生草本植物 黄 花篙 干燥地上部分，性寒，味苦、 辛，归肝胆经，可清热解暑、除 蒸、截疟，主要分布于重庆、四 川、云南、广西等地。 目前青篙 素系列药物已取代奎宁成为治疗 疟疾的最安全有效的药物 。 青蒿 素是青蒿抗疟的有效成分，也是 合成青蒿素系列药物的起始原料， 它的需求量很大。 为什么要测定青蒿素的含量 不同产地的青蒿药材中青篙素的 含量差异较大 ，而青蒿 素是青篙截疟的主要有效成分，因此对药材中青篙素含 量的准确测定十分必要。 提取青蒿素的溶剂 ： 青蒿素 C 15 H 22 O 5 在 丙酮 、乙酸乙酯、三氯甲烷或苯中易 溶 , 在甲醇、乙醇、稀乙醇、乙醚及 石油醚 中溶解 , 在水中 几乎不溶解 ; 在冰醋酸中易溶。 青蒿素的有效成分 青蒿素 是从黄花蒿中提取 分离得到的 含过氧基团的 新型半萜内酯 。其多种衍 生物均是治疗疟疾的有效 单体，国内外公认的 首创 新药 。将青蒿素结构中的 C-10 为羰基还原成羟基得 双氢青蒿素 ，进一步烷基 氧化得 蒿甲醚 ，而进行酯 化可得到 青蒿琥酯 。 青蒿素 artemisinin 双氢青蒿素 为天然抗疟药 青篙素经钠硼氢还原而产 生的半缩醛化合物 , 其 12 位的羟基具有差向异构 , 差向异构体 a 与 β 在一定 溶剂中有相互转化并达到 平衡的过程。 DHA 分子 结构中无共扼结构和发色 基团 , 不宜用分光光度法 或 HPLC 法测定含量。 双氢青蒿素 dihydroartemisinin 双氢青蒿素 定性分析 定量分析 紫外分光光度法 IR 、 MS 、 NMR HPLC (UV 、 ELSD 、 SPD...) UPLC LC-MS/ LC-MS-MS 高效毛细管电泳 CE TLC 1.1 青蒿素的 IR 定性分析 双氢青蒿素 dihydroartemisinin 3376 O-H;1227 C-O ; 1025 C-O-C;2925 -CH 3 ; 总结： IR 专属性强，一般做标准谱图对照法 1.2 紫外分光光度法 原理 ： 1. 由于青蒿素药物分子结构中母核不具有共轭体系，其紫 外吸收光谱的主要是末端吸收。但 C-10 位由于取代基不同 具有一定的吸收特征。 2. 青蒿素由于具有 过氧桥和缩醛结构 , 对酸碱不稳定 , 对 强碱极不稳定 , 热至熔点以上即迅速分解。采用 0.2% 氢氧 化钠