放线菌的形态观察.pptVIP

实验五 放线菌形态的观察 一、目的要求 1、学习并掌握观察放线菌形态的基本方法。 2、初步了解放线菌的形态特征。 二、基本原理 放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性细菌。常见放线菌大多能形成菌丝体，紧贴培养基表面或深入培养基内生长的叫基内菌丝（简称“基丝”），基丝生长到一定阶段还能向空气中生长出气生菌丝(简称“气丝”)，并进一步分化产生孢子丝及孢子。有的放线菌只产生基丝而无气丝。 在显微镜下直接观察时，气丝在上层、基丝在下层，气丝色暗，基丝较透明。孢子丝依种类的不同，有直、波曲、各种螺旋形或轮生。在油镜下观察，放线菌的孢子有球形、椭圆、杆状或柱状。能否产生菌丝体及由菌丝体分化产生的各种形态特征是放线菌分类鉴定的重要依据。 为了观察放线菌的形态特征，人们设计了各种培养和观察方法，这些方法的主要目的是为了尽可能保持放线菌自然生长状态下的形态特征。本实验介绍扦片法和印片法。 二、基本原理——扦片法、印片法 扦片法：将放线菌接种在琼脂平板上，扦上灭菌盖玻片后培养，使放线菌菌丝沿着培养基表面与盖玻片的交接处生长而附着在盖玻上。观察时，轻轻取出盖玻片，置于载玻片上直接镜检。这种方法可观察到放线菌自然生长状态下的特征，而且便于观察不同生长期的形态。 印片法：将要观察的放线菌的菌落或菌苔，先印在载玻片上，经染色后观察，这种方法主要用于观察孢子丝的形态，孢子的排列及其形状等。方法简便，但形态特征可能有所改变。 三、实验器材 1、菌种：细黄链霉菌(Streptomyces microflavus) 2、培养基：高氏Ⅰ号琼脂。 3、其他用具：高氏Ⅰ号琼脂平板、灭过菌的盖玻片、载玻片、接种环、接种铲、镊子、石炭酸复红染液、显微镜等。 四、操作步骤——扦片法 倒平板：取融化并冷至大约 50℃ 的高氏Ⅰ号琼脂约 20mL倒平板，凝固待用。（此步骤事先已完成） 接种：用接种环挑取菌种斜面培养物（孢子）在琼脂平板上划线接种。 扦片：以无菌操作用镊子将灭菌的盖玻片以大约 45°角扦入琼脂内 ( 扦在接种线上 ) ，扦片数量可根据需要而定。 培养：将扦片平板倒置，28℃培养，培养时间根据观察的目的而定，通常 3~5d 。 镜检：用镊子小心拔出盖玻片，擦去背面培养物，然后将有菌的一面朝上放在载玻片上，直接镜检。观察时，宜用略暗光线；先用低倍镜找到适当视野，再换高倍镜观察。 扦片法操作的关键步骤及注意事项： 倒平板要厚一些，接种时划线要密； 插片时要有一定角度并与划线垂直； 观察时，宜用略暗光线；先用低倍镜找到适当视野，更换高倍镜观察； 如果用0.1%美蓝对培养后的盖玻片进行染色后观察，效果会更好。 四、操作步骤——印片法 印片：用接种铲或解剖刀将平板上的菌苔连同培养基切下一小块，菌面朝上放在一载玻片上，另取一洁净载玻片置于火焰上微热后，盖在菌苔上，轻轻按压，使培养物（气丝、孢子丝或孢子）粘附（“印”）在后一块载玻片的中央，有印迹的一面朝上，通过火焰2-3次固定。 染色：用碳酸复红覆盖印迹，染色约1min后水洗。 镜检：干后用油镜观察。 印片法操作的关键步骤及注意事项 铲菌苔时注意不要将琼脂铲得太厚，以免影响压片； 玻片不要太热，以免琼脂融化，干扰放线菌的附着； 印片完毕后注意将印有放线菌的一面朝上进行固定。 五、实验报告 1、结果 绘图说明你所观察到的放线菌的主要形态特征。 * * 盖玻片 培养基 （下一个实验： 实验六 酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别） *