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柠檬酸发酵过程中有哪几个控制要点,如何控制?
答:(1)EMP畅通无阻:控制Mn2+、NH4+浓度,解除柠檬酸对PFK的抑制;控制溶氧,防止侧系呼吸链失活。
(2)通过CO2固定反应生产C4二羧酸,强化这一反应的方法:适量的生物素。
(3)控制培养基中的Fe2+ 的浓度,使顺乌头酸水合酶失活。
说明柠檬酸发酵过程中氧的重要性。
答: 乙酰CoA和草酰乙酸结合生成柠檬酸过程中要引进一个氧原子,因此氧也可以看作为柠檬酸生物合成底物。它对柠檬酸发酵的作用为:
(1)氧是发酵过程生成的NADH2重新氧化的氢受体。
(2)近来的研究发现,黑曲霉中除了具有一条标准呼吸链以外,还有一条侧系呼吸链。
当缺氧时,只要很短时间中断供氧,就会导致此侧系呼吸链的不可逆失活,而导致柠檬酸产酸急剧下降。
简述CO2固定反应对提高柠檬酸产率的意义?
答:(1)无CO2固定反应的产率
合成1分子柠檬酸需要3分子乙酰 辅酶A,也就是需要1.5分子的葡萄 糖。
理论产率为:
192 /( 180×1.5) = ?71.1%
(2)通过CO2固定反应提供C4二羧酸
葡萄糖生成柠檬酸的全过程中,在碳平衡方面没有碳原子的损失,在乙酰COA和草酰乙酸缩合时还从水中引进一个氧原子,总反应式为:
C6H12O6+1.5O2→C6H8O7+2H2O
可见柠檬酸发酵对糖的理论转化率为106.7%,以含一个结晶水的柠檬酸计为116.7%
简述黑曲霉柠檬酸高产菌的生理特征?
答:(1)能耐高浓度的柠檬酸(15%以上)而不利用和分解柠檬酸。
(2)耐高浓度葡萄糖,能产生和分泌大量的酸性淀粉酶和酸性糖化酶
(3)能抗微量金属离子,尤其能抗较高浓度的锰、Mn2+、Cu2+。
(4)在深层液体发酵培养时,能形成大量的细小球体,球体直径为0.1mm。
(5)在以葡萄糖为唯一碳源的合成培养基上。生长不好,生成小菌落,包子形成能力弱。
(6)在生长、繁殖期,细胞内具有较高水平的氨基酸,NH4+,水平高
(7)菌丝体中含有底水平的甘油三酯和磷酸酯。
(8)细胞壁几丁质含量高,但β-葡聚糖和聚半乳糖含量低。
(9)在生长和产酸期,细胞内蛋白质、核酸水平低。
(10)具有很强的侧系呼吸链活性,此侧系呼吸链不产生ATP。
详述黑曲霉柠檬酸生产菌的分离、选育原理与操作过程?
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