人教版微生物分离与计数.ppt

专题 2 : 微生物的培养与应用 课题 1 我们学习了培养基的配 制以及微生物的培养（接种技术）。 下面我们来学习如何进行 细菌的分 离 ，获得所需要的目的微生物，并 对目的微生物进行培养 计数 。 一、研究思路 筛选菌株 自然界筛选： 根据它对生存环境的要求，到相应的 环境中去寻找。 实验室筛选： 人为提供有利于 目的菌株 生长的条件 （包括 营养、温度、 pH 等），同时抑制或阻止其 他微生物生长。 选择培养基： 在微生物学中，将 允许 特定种类的微 生物生长，同时 抑制或阻止 其他种类微生物生长 的培养基。目的是从众多微生物中分离所需要的 微生物。 测定微生物数量的方法： 1 、直接计数法：最常用的 显微镜直接计数 。 先将待测样品制成悬液，然后取 一定量的悬液放在显微镜下进行计数。根据在显 微镜下观察到的微生物数目来计算出单位体积内 的微生物总数。 优点：设备简单、能观察微生物的形态特征。 缺点：不能区分死菌和活菌； 难以计数微小的细菌。 一般用于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体的计数。 统计菌落数目 2 、间接计数法：最常用 稀释涂布平板计数法 应用：统计样品中活菌的数目 原理： 当样品的稀释度足够高 时，培养基表面生长的一个菌 落，来源于样品稀释液中的 一个活菌，通过统计平板上的 菌落数，就能推测出样品中大 约含有多少活菌。 （注意） ： 一般选择菌落数在 30-300 的平 板 进行记数。 稀释度很重要，一般选择三个稀释度中的 第二稀释度到平板所出现的平均菌落数在 50 个 左右为最好。 操作：设置重复组， 增强实验的说服力和准确性。 将待测样品经过一系列的稀释，然后选择三个稀释 度的菌液均匀涂布在平板上，然后培养。 （注意）：为了结果接近真实值，可将同一稀释 度菌液涂布到 3 个或 3 个以上的平板上，经培养，计 算出菌落的平均数。 对照原则： 判断培养基中是否有杂菌污染，将 未接种的培养基同时进行培养。 判断 选择培养基 是否具有筛选作用， 对照培养基 接种后培养观察菌落数目。 计算公式：每克样品中的菌株数 = （ C/V ） *M （ 1 ）原理：尿素是一种重要的农业氮肥，只 有当土壤中 的 细菌将尿素分解成氨之后， 才能 被植物利用。 尿素细菌能合成脲酶， 在脲酶的作用下尿素被分解成氨。 CO(NH 2 ) 2 +H 2 O CO 2 +2NH 3 二、实验设计 （ 2 ）实验设计的内容包括实验方案、材料用 具、实施步骤和时间安排等。 （ 3 ）实验流程： 土壤取样 样品系列稀释 涂布平板与培养 观察并记录结果 菌落计数 1 、 土壤微生物 主要分布在距地表 3 ～ 8cm 的近中性土壤中， 约 70 ％～ 80 ％为细菌。 2 、分离不同的微生物采用不同的 稀释度 ，其原因是不同微生物在 土壤中含量不同，其目的是保证获得菌落数在 30 ～ 300 之间、 适于计数的平板。 细菌稀释度为 104 、 105 、 106 ， 放线菌稀释度为 103 、 104 、 105 ， 真菌稀释度为 102 、 103 、 104 。 3 、 培养不同微生物往往需要不同培养温度。 细菌一般在 30 ～ 37 ℃ 培养 1 ～ 2d ， 放线菌一般在 25 ～ 28 ℃ 培养 5 ～ 7d ， 霉菌一般在 25 ～ 28 ℃ 的温度下培养 3 ～ 4d 。 4 、 在 菌落计数 时，每隔 24h 统计一次菌落数目。选取菌落数目稳 定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。 点评：菌种中有些菌体增殖快，有些菌体增值慢，所以培养 时间要充足，使得每个菌体都能形成肉眼可观察到的菌落。 5 、 菌落的特征 包括 形状、大小、隆起程度、颜色 等方面。 三、 结果分析与评价 （ 1 ） 对分离的菌种作进一步的鉴定，还需要借助 生物化 学 的方法。 (2) 在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的 脲酶 将 尿素分解成了 氨 。氨会使培养基的碱性 增强 ， PH 升高 。 因此，我们可以通过 检测培养基 pH 变化 来判断该化学反 应是否发生。 (3) 在以 尿素 为唯一氮源的培养基中加入 酚红 指示剂 。 培养某种细菌后，如果 PH 升高，指示剂将 变 红 ，说明该 细菌能够 分解尿素 。 [ 思考 10] 测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的 水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到 伊红美蓝 培养基上 培养，大肠杆菌菌落呈现 黑 色，通过记述得出水样中大 肠杆菌的数量。你认为在该实验中至少应取 三 个水样。 四、课堂总结、点评 实验方案 土壤 中尿 素分 解菌 的分 离与 计数 分离筛选微生物的 原理 有利于目的菌株生长 抑制或阻止其他微生物生 长 人为 条件 微生物计数方法与 原理 稀释涂布 平板法 显