卵母细胞冷冻技术分析.ppt

冷冻技术概述 随着生物学、医学和低温制冷技术的发展,低温冷冻 技术已逐渐形成的一门边缘学科低温生物学,该领域主 要应用是在保存各种细胞、组织、胚胎、器官甚至是活 体的冷冻保存。 在超低温条件下动物种质细胞之所以能长期保存,是 因为种质细胞内一切新陈代谢过程中的化学变化被超低 温所抑制,当温度降到一定限度时,细胞内所有的化学 变化也就处于一种“暂停”状态而使细胞得以长期保存; 低温保存的细胞以一定的方式复苏后,又具有存活的能 力  冷冻技术概述 影响动物种质细胞冷冻保存的两个关键因素 ①冷冻模式 ②防冻剂 1.1常用的冷冻模式包括程序降温法和玻璃化法 程序降温法利用程序降温仪,按照预先设计的 降温程序将细胞降低至植冰温度,再迅速降温至零下 35度,然后保存在液氮中的过程。  冷冻技术概述 玻璃化法指将经过不同防冻剂浓度平衡后的细胞 直接投入到液氮中保存。高浓度防冻剂在快速降温过程中 由液态转化为一种类似于玻璃状的形态,而不形成冰晶, 不会产生细胞内冰晶形成所致的化学、物理损伤,使得冷 冻技术更加简洁,迅速,廉价。  冷冻技术概述 1.2冷冻保护剂分为渗透性和非渗透性两种 ①渗透性冷冻保护剂主要有丙二醇(PRoH)、二 甲基亚砜(DMso)、甘油和乙二醇(EG)等 渗透性冷冻保护剂主要通过细胞膜,降低溶液的冰 点,增加溶液的粘性,稀释溶液中的溶质浓度