高中生物 112 无菌操作和接种技术及微生物的分离培养与数量测定同步课件 苏教版选修1.ppt

【解析】 操作前要将接种环放在酒精灯的 外焰灼烧进行灭菌；整个操作过程要在酒精 灯旁进行； 1 、 2 、 3 、 4 、 5 这五个区域都可 能有所需菌落；在每次画线前对接种环灼烧 是为了杀死上次画线结束后接种环上残留的 菌种，画线结束后对接种环灭菌是为了杀死 接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和 感染操作者。 【答案】 D 变式训练 2. 有关稀释涂抹平板法的叙述，错误的是 ( ) A ．首先将菌液进行一系列的梯度稀释 B ．然后将不同稀释度的菌液分别涂抹到琼脂 固体培养基的表面 C ．适宜条件下培养 D ．结果都可在培养基表面形成单个的菌落 解析：选 D 。稀释涂抹平板法是将菌液进行一 系列的梯度稀释。然后将不同稀释度的菌液分 别涂抹到琼脂固体培养基的表面，在适宜条件 下培养。只有在稀释度足够高的菌液里，聚集 在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能 在培养基表面形成单个的菌落。 要点三 菌落数目的统计方法 1. 显微镜直接计数法 (1) 原理：此法利用特定细菌计数板或血细胞 计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中 微生物的数量。 (2) 方法：用计数板计数。计数板是特制的载玻 片，其上有特定的面积为 1 mm 2 ，高为 0.1 mm 的计数室，一个计数室又被分成 25 个 ( 或 16 个 ) 中 格，每个中格再被划分成 16 个 ( 或 25 个 ) 小格，每 个计数室都由 400 个小格组成。 (3) 操作：将稀释的样品滴在计数板上，盖上盖 玻片，然后在显微镜下计数 4 ～ 5 个中格中的细 菌数，并求出每个小格所含细菌的平均数，再 按计算公式求出每毫升样品中所含的细菌数。 (4) 计算公式 每毫升原液所含细菌数＝每小格平均细菌数 × 400 × 10000 ×稀释倍数。 (5) 缺点：不能区分死菌与活菌。 2. 间接计数法 ( 活菌计数法 ) (1) 原理：当样品的稀释度足够高时，培养基 表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中 的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就 能推测出样品中大约含有多少活菌。 (2) 操作 ①设置重复组，增强实验的说服力与准确性。 将待测样品经一系列 10 倍稀释，然后选择三个 稀释度的菌液，分别取 0.1 mL 接种到已制备好 的平板上，然后用无菌涂布器将菌液涂布在整 个平板表面，放在适宜的温度下培养计数菌落 数。为使结果接近真实值，可将同一稀释度菌 液加到三个或三个以上的平板上，经涂布、培 养，计算出菌落平均数。 ②为了保证结果准确，一般选择菌落数在 30 ～ 300 的平板进行计数，若设置的重复组中结果 相差太远，意味着操作有误，需重新实验。 3. 滤膜法 (1) 实例：测定饮用水中大肠杆菌的数目。 (2) 过程：将已知体积的水过滤后，将滤膜放于 肠杆菌菌落呈现绿色，并带有金属光泽可根据 培养基上绿色的菌落数目，计算出水样中大肠 杆菌的数量。 特别提醒 统计菌落数目的注意事项： ①一般选择菌落数在 30 ～ 300 的平板进行计数。 ②统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。 ③统计结果一般用菌落数而不是用活菌数表示。 ④设置对照，目的是排除实验组中无关因素对实 验结果的影响，提高实验结果的可信度。 下列是关于检测土壤中细菌总数实验操 作的叙述，其中错误的是 ( ) A ．用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高 温、高压灭菌后倒平板 B ．取 10 4 、 10 5 、 10 6 倍的土壤稀释液和无菌水 各 0.1 mL ，分别涂布于各组平板上 C ．将实验组和对照组平板倒置， 37 ℃恒温培 养 24 ～ 48 小时 D ．确定对照组无菌后，选择菌落数在 300 以上 的实验组平板进行计数 例 3 【思路点拨】 本题主要考查统计菌落数目 的方法，解答本题需从以下几点入手： ①区分实验材料的灭菌方法。 ②理解空白对照在菌落计数实验中的作用。 ③明确菌落计数的选择范围。 【解析】 本题考查的是土壤微生物总数的 计数，所以培养所使用的培养基就应该是基 本培养基，并要经过高压蒸汽灭菌处理；涂 布时要对样本的水溶液进行稀释，一般选取 10 4 、 10 5 、 10 6 倍的土壤稀释液各 0.1 mL 进行 涂布，为了检查平板培养基是否制备合格， 要同时把一培养基接种少量无菌水，以作空 白对照； 培养一段时间后，如果平板上菌落个数在 30 ～ 300 之间，即可把该组所有平板的菌落计数，然 后取其平均值，即可计算出土壤细菌的总数。 而 D 项是菌落数在 300 以上，故 D 项错。 【答案】 D 互动探究 C 项倒置平板的目的是什么？ 【提示】 防止皿盖上的冷凝水落入培养基， 造成培养基污染。 【探规寻律】 每一稀释度下设置多于 3 个 平板，一般选择菌落数在 30 ～ 300 之间的平 板