复方苦参注射液联合顺铂对lewis肺癌小鼠抗肿瘤作用研究.pdf

摘要 摘 要 肺癌的发病率和死亡率在所有癌症中位居第一，严重危害人类生命健康。肺癌早期 诊断困难，一旦确诊大多已为中晚期，预后极差。目前肺癌治疗手段有手术、化疗、放 疗、靶向治疗等，但肺癌早期的手术治疗和肺癌晚期的化疗仍然是其主要治疗手段。顺 铂具有抗肿瘤活性强、抗癌谱广等特点，在临床上广泛用于多种癌症的治疗。但其引发 的不良反应如肾毒性、肝毒性、耳毒性等，限制了其临床应用。故临床上多采用联合用 药从而达到增效减毒的目的。复方苦参注射液由苦参和白土苓两味中药加工制成，用于 癌症治疗效果显著、无明显不良反应。大量临床研究表明，复方苦参注射液联合顺铂治 疗肺癌，疗效确切且无明显毒副反应，但两药联合抗肿瘤作用机制仍未得到充分阐明。 此外，关于复方苦参注射液对顺铂导致的肝肾损伤是否具有保护作用的研究鲜有报道。 因此，本课题对复方苦参注射液和顺铂联合用药的抗肿瘤作用及机制进行了探索，并初 步探究了复方苦参注射液对顺铂导致的肝肾损伤的保护作用；以期为临床用药提供科学 依据和理论指导。 本课题的主要研究内容如下：（1）将 40 只雄性 C57BL/6 小鼠随机分为对照组 （Control ）、复方苦参注射液组（CKI ）、顺铂组（DDP ）及联合组（CKI+DDP ）,每组 10 只。皮下注射 lewis 肺癌细胞建立 lewis 肺癌小鼠模型，并通过肿瘤重量、抑瘤率等 指标检验联合用药的抑瘤效果。（2 ）采用 ELISA 法检测小鼠血清中细胞因子 IL-4 、 IFN-γ 的水平，以探究CKI 对免疫功能的影响。（3 ）采用TUNEL 染色检测小鼠肿瘤组 织细胞凋亡情况，并采用Western blot 法检测肿瘤组织中凋亡相关蛋白cleaved caspase-3 的表达。（4 ）用 ELISA 法检测小鼠肿瘤组织匀浆中糖酵解途径限速酶乳酸脱氢酶 （LDH ）及己糖激酶（HK ）活性、能量代谢最终产物三磷酸腺苷（ATP ）及糖酵解作 用最终产物乳酸（Lactate ）含量，并用 Western blot 法检测肿瘤组织中糖酵解相关蛋白 丙酮酸激酶 M2 型（PKM2 ）、磷酸果糖激酶-2/果糖-2,6-二磷酸酶 3 （PFKFB3 ）的表达。 （5 ）采用HE 染色法观测小鼠肝、肾组织病理形态学变化，以探究CKI 对DDP 导致肝 肾损伤的保护作用。通过上述研究发现：（1）小鼠一般情况：小鼠皮下接种 lewis 肺癌 细胞 7 天后，右腋皮下可触及实体瘤块。小鼠进食情况、精神状态、反应灵敏度均不及 接种前，皮毛出现光泽欠佳、脱落等现象。伴随小鼠生长，上述情况进一步变差； Control 组小鼠情况最为严重，CKI 组小鼠状态最佳，DDP 组及 CKI+DDP 组小鼠状态 相当，且介于CKI 组与Control 组之间。（2 ）对小鼠体重及有效体重的影响：与Control 组相比，CKI 组处死时小鼠体重及有效体重无显著性变化 （P0.05 ）；DDP 、CKI+DDP 组小鼠处死时体重及有效体重均显著下降 （P0.001 ）。与DDP 组相比，CKI+DDP 组处 死时小鼠体重及有效体重无显著性变化 （P0.05 ）。（3 ）对瘤重及抑瘤率的影响：CKI 、 DDP 及 CKI+DDP 组的平均瘤重分别是 （5.93±1.43 ）g、（3.55±0.68 ）g、（1.92±0.67）g, 且均显著低于 Control 组瘤重 （P0.01）。与 DDP 组相比，CKI+DDP 组瘤重显著降低 - I - 哈尔滨商业大学硕士学位论文 （P0.05 ）。此外，CKI 、DDP 及 CKI+DDP 组抑瘤率分别为26.05% 、55.68%、76.05%, 据金氏公式计算得 q 值约为 1.13，提示两药合用具有相加效应。（4 ）对小鼠血清细胞因 子的影响：与Control 组相比，CKI、DDP 及CKI+DDP 组小鼠血清中IFN-γ 、IL-4 水平 均无显著性差异 （P0.05 ）。（5 ）对肿瘤组织细胞凋亡的影响： Contro