葛根素通过能量代谢影响低氧诱导的PASMCs增殖.pdf

Abstract 摘 要 肺动脉高压是一种致命性疾病，由于肺血管阻力和肺动脉压升高而导致右心衰竭。 其主要的病理生理学机制是由于肺动脉血管内皮细胞和平滑肌细胞的异常增殖而引起的 肺血管收缩和肺动脉管腔狭窄。当前对于肺动脉高压的药物治疗研究仍进展较慢，但是 可以在一定程度上改善其愈后。葛根素是一种从中药葛根中提取的异黄酮，对抑制增殖、 心血管系统，神经系统，骨质疏松症，肝损伤以及体内和体外炎症都有作用。 在肺动脉高压的发展过程中，能量代谢的转变也是其中重要的病理过程。近几年的 研究也显示葛根素对肺动脉高压和抗增殖都有一定的治疗作用，但是其具体的抗增殖机 制仍不明。在本实验中首先对肺动脉高压动物模型进行评价，通过缺氧诱导大鼠肺动脉 高压，采用右心导管法对成模后大鼠的血流动力学等生理指标进行评价，同时采用免疫 组化法和Western Blot 对大鼠肺组织中己糖激酶Ⅱ 、丙酮酸激酶2 和丙酮酸脱氢酶的表达 进行检测，测定在缺氧条件下能量代谢关键酶的表达。之后对肺动脉平滑肌细胞进行体 外培养，通过CCK8 和KI-67 实验分析缺氧条件下葛根素对细胞增殖的影响；通过Western Blot 检测能量代谢关键蛋白的表达变化，采用ATP 检测试剂盒检测细胞ATP 产量，进一 步确定葛根素对低氧状态下肺动脉平滑肌细胞能量代谢的影响。同时使用化学抑制剂抑 制能量代谢过程，通过Western Blot 测定增殖细胞核抗原PCNA 的表达，CCK-8 法测定 细胞增殖的变化，进一步观察抑制能量代谢后葛根素是否能发挥抗增殖作用。 通过以上实验结果显示无论在体内还是体外葛根素均可能是通过能量代谢过程抑制 肺动脉平滑肌细胞增殖而发挥保护作用。在缺氧大鼠模型中，肺动脉血管壁显著增厚， 肺动脉压升高(P0.01) ，能量代谢过程关键蛋白己糖激酶Ⅱ 、丙酮酸激酶2 表达显著下调， 丙酮酸脱氢酶显著上调(P0.01) 。在细胞模型中，通过对细胞活力的检测显示葛根素有抑 制细胞活力的作用。对细胞ATP 产量的结果也显示，葛根素具有恢复缺氧条件下细胞ATP 产量的作用 （P0.01 ），同时对细胞中能量代谢关键蛋白的表达检测结果与大鼠组织中结 果一致，表明葛根素对低氧条件下大鼠肺动脉平滑肌细胞能量代谢具有显著影响，以上 结果证明葛根素对低氧条件下的肺动脉平滑肌细胞有一定的治疗作用。最后通过抑制细 胞能量代谢过程，发现细胞中增殖细胞核抗原PCNA 表达没有显著变化，CCK8 结果同 样显示加入抑制剂后葛根素难以发挥抗增殖的作用 （P0.01 ）。本研究证明葛根素缓解肺 动脉高压可能是通过影响能量代谢，抑制能量代谢过程时葛根素难以发挥其治疗作用， 能量代谢可能是葛根素的作用位点，并为今后葛根素治疗PAH 提供一定的药理基础。 关键词 葛根素；肺动脉高压；肺动脉平滑肌；能量代谢；增殖 I 哈尔滨商业大学硕士学位论文 Abstract Pulmonary arterial hypertension is a fatal disease that leads to right heart failure by pulmonary vascular resistance and elevated pulmonary arterial pressure. It is main caused by pulmonary vasoconstriction and pulmonary arterial lumen narrowing due to proliferation of pulmonary artery endothelial cells and smooth muscle cells.The development of drug therapy has improved the prognosis of pulmonary hypertension resently, although it remains poor.Puerarin is an