青蒿素固体分散体制备及猫眼草黄素影响青蒿素耐药研究.pdf

摘要 摘 要 本实验研究了青蒿素固体分散体 （Artemisinin solid dispersions，ART SDs）的制备 工艺并确定了工艺参数，初步阐述青蒿素工业生产废料中的非抗疟成分猫眼草黄素基于 转运体影响青蒿素耐药性机制，为寻找青蒿素耐药外排小分子抑制剂奠定重要基础。 建立紫外分光光度法测定青蒿素固体分散体的含量，确定桨法测定其溶出度。青蒿 素固体分散体采用溶剂法制备，通过单因素筛选载体种类、载体比例、搅拌时间、溶剂 用量，以溶出度为评价指标优化处方确定青蒿素固体分散体的最佳制备工艺，以红外吸 收光谱法 （IR）、差示扫描量热法 （DSC）对青蒿素原料药 （Artemisinin）、大豆卵磷 Soy lecithin PVPk30 6000 PEG6000 脂 （ ）、聚乙烯吡咯烷酮 （ ）、聚乙二醇 （ ）、物理 Physicalmixture PM Solid dispersions SDs 混合物 （ ， ）、固体分散体 （ ， ）进行鉴别。筛 选出的最佳制备工艺为：青蒿素-大豆卵磷脂-PVPk30 1: 1:7。无水乙醇溶剂20mL， 30min 50 24h IR DSC 搅拌时间 ， ℃干燥 。红外吸收光谱法 （ ）、差示扫描量热法 （ ）结 果表明青蒿素与载体间形成氢键且以新的无定型状态存在。在溶出结果显示青蒿素原料 药40min 内几乎不溶出，固体分散体在30min 内快速溶出，30min 后达到溶出平衡， 溶出度达到87.2%。 Plasmodiumberghei 通过血传伯氏疟原虫 （ ），建立青蒿素敏感、抗性小鼠模型，分 别连续灌胃给予青蒿素、青蒿素固体分散体、青蒿素固体分散体-丙酮层、猫眼草黄素 - 1:2 及青蒿素分散体 猫眼草黄素 （ ）复配药物，考察不同药物处理组小鼠的抗疟活性。 检测抗疟活性发现青蒿素、青蒿素固体分散体在抗性小鼠模型上原虫寄生率高于敏感小 鼠，而抑制率低于敏感组；猫眼草黄素单用组及青蒿素分散体-猫眼草黄素复配组在敏 感动物模型上无抗疟活性，但在抗性小鼠感染模型上敏感性增加，原虫寄生率显著降 低，而抑制率显著升高。 采用RT-qPCR 法，考察不同药物处理组小鼠小肠MRP （1、2、4、5）/ABCC1、 ABCC2 ABCC4 ABCC5mRNA RT-qPCR 、 、 表达水平变化。 法表明青蒿素、青蒿素固 体分散体连续给药七天可显著上调MRP2/ABCC2mRNA 表达，猫眼草黄素单用组及复 配组可显著逆转由青蒿素诱导上调的MRP2基因表达水平。 Artemisinin solid dispersions ART SDs 本实验确定的青蒿素固体分散体 （ ， ）制备工 艺操作简单，显著改善了青蒿素的溶出度，解决了青蒿素水溶性差的问题。发现青蒿素 耐药性形成的关键机制可能与MRP2 密切相关。猫眼草黄素可显著下调MRP2/ABCC2 mRNA 表达水平是其逆转青蒿素耐药性的重要作用机制之一。 关键词 青蒿素；固体分散体；猫眼草黄素；耐药性；转运蛋白 - -I 哈尔滨商业大学硕士学位论文 Abstract