关于生物制药技术.pptx

第二章 关于生物制药技术;第一节 生物技术在制药工业中的应用;一：酶蛋白抑制剂;二：基因工程药物;1：细菌基因工程;2：哺乳动物细胞工程;转基因动物;3：哺乳动物体内生物反应器工程;哺乳动物的基因动物克隆技术;4：哺乳动物乳腺反应器工程;哺乳动物乳腺反应器工程优点;三：动物细胞基因在植物中的表达;1、植物生物反应器实例（1）;1、植物生物反应器实例（2）;1、植物生物反应器实例（3）;2：动物基因在植物中的表达中的优缺点;四：基因重组疫苗 ;1、基因疫苗的生产方法;2、 基因疫苗的种类??特征;3、基因疫苗的优缺点;五：基因治疗药物;第二节 生物制药技术概论;一：从DNA→mRNA→Pr;二：细胞破碎技术;（一）物理方法;（二）化学方法;（三）新型技术和方法;三：提取技术;萃取法;（1）液-液萃取;（2）化学反应萃取;（3）其它萃取技术;（4）双水相萃取;四：分离纯化技术;（一）：膜分离技术;3：超滤技术;（二）：层析技术;1：无机基质分离介质;无机基质分离具体方法;2：有机高分子基质分离介质;（3）离子交换层析;A：离子交换剂的性质;B：离子交换剂的类别;C：离子交换剂的处理;（4）凝胶分子筛层析;A：凝胶层析的骨架介质;B：凝胶层析介质的主要产品的品牌;C：根据不同洗脱液的凝胶层析分类;（5）亲和层析;（三）：电泳技术;;五：灭菌技术;六：干燥技术;第三节：基因工程技术;基因重组技术图示;一：基因工程的四个技术基础;二：基因工程的步骤;（一）：工程载体的构建;1、基因工程载体的定义;2、质粒;（1）质粒的特性;（2）常用的质粒;质粒PBR322;质粒PGBKT7-53;质粒PGEM-3Z;质粒PUC18/19;科斯质粒;l噬菌体基因组;酵母菌人工染色体;（3）质粒pBV220的结构;（4）质粒的分离和提纯;A：质粒的分离和提纯的定义;B：质粒的分离和提纯的基本步骤;C：质粒的分离和提纯的方法;（a）差示离心沉淀法;（b）DNA变性处理法;（c）氯化铯梯度密度离心法;（5）质粒上的克隆方法;A：插入失活法;（a）插入失活蓝白斑筛选技术;（b）抗药性基因插入失活原理;（c）抗药性基因插入失活的改进方法;B、定向克隆法;C、磷酸酯酶处理线型质粒DNA法;（二）：DNA分子的重组;（三）：基因的分离;（1）物理学密度梯度离心法;（2）凝胶电泳分离技术;（3）互补DNA分离法（c-DNA法）;第一步、 双链cDNA的制作; mRNA的分离;mRNA;;第二步、线性质粒DNA的制作;第三步、双链cDNA和线性质粒DNA链的拼接;;（4）鸟枪法;A：鸟枪法的具体步骤;B ：鸟枪法的优缺点;（四）：重组体的选择和鉴定;（1）遗传学方法;（2）免疫学方法;（3）原位杂交法;A：原位杂交法的定义;B：原位杂交法的步骤;原位杂交的图示;（4）原位放射免疫法;A：原位放射免疫法的原理;B：原位放射免疫法的显色试剂;C：原位放射免疫法的步骤;（5）聚合酶连锁反应（PCR法）选择克隆株;差异展示PCR法（DD-PCR);（6）蛋白质转译表达法;（五）：重组DNA的表达---真核基因在大肠杆菌中的表达;1、表达条件（1）;1、表达条件（2） ;2、表达细则;3、表达方式;（1）融合蛋白表达方式;;A：融合蛋白的定义;B：融合蛋白表达方式的优缺点;C：融合蛋白表达方式的改进措施;D：融合蛋白的具体表达方式;关键： 受体蛋白与外源蛋白的阅读框要对齐 两个蛋白的结合位点的设计很重要，应便于下一步切除受体蛋白的操作。;常用的受体蛋白（原核细菌表达的蛋白质）;受体蛋白的切除方法 化学断裂法：溴化氰（CNBr）--Met--AA 酶促断裂法：凝血因子Xa，有蛋白酶活性，识别序列:Ile－Glu－Gly－Arg－AA ;（2）非融合蛋白表达方式;A：非融合蛋白表达方式的定义;B：非融合蛋白表达方式的优缺点;C：非融合蛋白的具体表达方式;（a）非融合基因—非融合蛋白;（b）融合基因—非融合蛋白;（3）分泌蛋白表达方式;A：分泌蛋白表达的原理;分泌蛋白表达的原理图示;B：分泌蛋白表达常用的信号肽;关于基因表达的总结;第四节：原生质体融合技术;原生质体培养和细胞融合技术图示 ;1：选出二个带有标记的亲株;2：二个亲株分别制备原生质体;（1）革兰氏阳性细菌;（2）革兰氏阴性细菌;（3）链霉菌;（4）酵母菌;（5）霉菌;3：二种原生质体进行融合;（1）病毒介导法;（2）聚乙二醇(PEG)法; 聚乙二醇法的步骤图示; （3）电融合法; 电融合仪;4：细胞壁的再生;5：融合子的选择; 亲本细胞 同核体 异核体 多核体 异胞质体 核质体;融合细胞的筛选机制;融合细胞的互补选择技术;1、有时候读书是一种巧妙地避开思考的方法。六月-20六月-20Sunday, June 14