中药鉴定学实验指导.pptx

中药鉴定学实验;总论;各论 ;二、仪器、试剂及材料 1．仪器 生物显微镜、酒精灯、盖玻片、载玻片、镊子、解剖针、擦镜纸、吸水纸、火柴、绘图铅笔(HB、2H、4H)、直尺和橡皮，以上都是每次实验必备品。另需单（双面）刀片或剃刀、徒手切片器、培养皿。 2．试剂 甘油、水、水合氯醛试液、甘油醋酸试液、间苯三 酚试液、浓盐酸，以上都是实验室必备试液。 3．材料 制作徒手切片和表面制片，可选用新鲜药材；制作粉末片，选用干燥药材的粉末。 ;三、实验内容;低倍镜的操作方法;高倍镜的操作方法;光源的调节;使用显微镜注意点;2 粉末制片法 ;粉末的制备;粉末制片;水合氯醛处理制片：取粉末少许，置于洁净的载玻片上，滴加水合氯醛试液1～2滴，混合后在小火焰上来回加热，并以解剖针搅拌（切勿使溶液蒸干），补充2～3次水合氯醛试液，然后将处理的粉末集中一处，为防止水合氯醛结晶析出，滴加稀甘油混合后盖上盖玻片，用滤纸屑清洁盖玻片周围的多余药液，即可置显微镜下观察。水合氯醛试液可除去细胞中的淀粉，油脂等，增加细胞壁的折光率，还能使萎缩的细胞壁膨胀，从而使细胞的形态更加清晰。 ;3．组织简图绘制要领 ; (1)绘图的一般原则：;(2)徒手绘图法的步骤：;实验二 显微测量和显微描绘技术 ;（二）仪器、试剂及材料 1.仪器　XS系列显微镜、单（双）面刀片、烧杯、试管、目镜测微尺、载台测微尺、显微描绘器、绘图板、恒温水浴、量筒。 2.试剂　10%硝酸、10%铬酸、浓硝酸、氯酸钾、5%～15%的氢氧化钾溶液 3.材料　虎杖、麦冬等。 ;（三）实验内容 1．解离制片法 2．显微测微尺的使用 3．描绘器的使用及描绘图放大倍数的计算 ;解离制片法 系利用化学试剂使植物体的细胞与细胞 间的中层物质溶解，细胞相互分离的方法。适用于研究细胞的立体形态结构，尤其适宜观察导管、管胞、石细胞和纤维等增厚壁的状况。欲解离的材料，需先切割成2mm的薄片。;根据选用解离的试剂不同分为以下几种方法： 氢氧化钾解离法 硝酸-铬酸离析法 氯酸钾法 ; 氢氧化钾解离法： 适用于柔软的植物材料。将切???好的材料置于坩埚中，加5％氢氧化钾溶液适量，加热至用玻璃棒挤压能离散为止。如离析的材料稍硬，可用6％～10％氢氧化钾液加热使之离析，尚可更换一次试液。待材料能被轻压离散时，倾去碱液，用水洗至中性，即可取所需部位加稀甘油制片观察。用氢氧化钾溶液能逐渐除去细胞中的淀粉、蛋白质、油脂及色素，其作用较水合氯醛强，并能使细胞膨胀，若作用时间较长，能使纤维性组织解离，并可引起薄壁组织的破坏和变形。所以加热处理时间不宜太长。 ;硝酸-铬酸离析法：适用于木质化组织，如木材、根、茎、树皮等材料，将材料放入坩埚或试管中，加10％硝酸与10％铬酸的等量混合液，其量为材料的20倍，放置浸渍的时间，视材料的性质而异，一般为1-2日或更长的时间。也可以采用加温的办法来缩短浸渍时间，以材料用玻璃棒轻压，可以离散为度，然后用水洗至中性，即可制片观察。 硝酸和铬酸均为强氧化剂，解离速度较快，如解离柔软较嫩的材料，应注意掌握时间。经硝酸、铬酸解离的材料，草酸钙、碳酸钙结晶及淀粉粒、脂肪油等均已消失。 ; 氯酸钾法：本法适用于坚硬的材料，如木类及某些坚硬的果皮、种皮等，将材料置坩埚或小烧杯中，加50％硝酸试液约5ml及氯酸钾粉少量，缓缓加热至沸，当气泡渐少时，再及时加入少量的硫酸钾，以维持气泡稳定产生(约15～20分钟)，至材料能分离开时，倾去试液，加水洗涤数次，即可制片观察。采用此解离法制片需在通风处进行，以防氯气中毒。 ;2．显微测微尺的使用 显微测微尺是用来测量显微镜下所见物体长度、大小的标尺，包括载台测微尺和目镜测微尺。载台测微尺：为一特制的载玻片，在载玻片的中央封有 lmm长的小尺，精确分成10大格，每大格又分10小格，共100小格，每小格长度为 0.0lmm，即l0μm标尺的外围有一小黑环，便于在显微镜下寻找标尺。载台测微尺并不直接用来测量显微镜下物体的长度和大小，而是用以校正目镜测微尺的。经过校正之后的目镜测微尺，方可用来测量显微镜下物体的大小。目镜测微尺为一直径约20mm的圆形玻片，玻片的中央部分具有一小尺，精确地分成50小格或100小格(图2—2)。使用目镜测微尺时，将目镜自镜筒中抽出，旋开镜片，将目镜测微尺的标尺正面向上，安放在目镜中部的隔板上，旋上镜片，放回原镜筒内，进行测量。由于目镜测微尺每小格的长度随显微镜放大的倍数而改变，故在使用前必须将各物镜头逐一用载台测微尺加以校正，以便确定在使用此显微镜时各组镜头下目镜测微尺每小格所代表的实际长度。 ;(1)目镜测微尺的校准：将载台测微尺放在显微镜