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常规考马斯亮蓝染色液使用说明 货号：P1310 规格：100mL/500mL 保存：室温保存，有效期12个月。 产品说明： 考马斯亮蓝染色液(Commassie Blue Staining Solution)是以考马斯亮蓝R250为染料可用 于SDS或非变性PAGE等蛋白电泳胶的常规染色或Western转膜后PAGE胶上残余蛋白 的检测。采用常规染色方法需至少 1h，采用快速染色方法一般数分钟即可。本染色液经过 改良，不含有毒的甲醇，但含有刺激性气味的乙酸。 自备材料： 水平摇床或侧摆摇床、蒸馏水、20%甘油水溶液、(可选)加热装置 操作步骤(仅供参考)： (一) 常规染色脱色方法 1、 PAGE 电泳结束后取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色液中，确保染色液可以充分覆盖凝胶。 2、 置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温染色1小时或更长时间。具体的染色时间取 决于凝胶的厚度和染色时的温度。凝胶较厚，温度较低，则染色时间宜适当延长。凝胶较薄， 温度较高，则染色时间可以适当缩短。通常染色至凝胶的颜色和染色液的颜色非常接近，在 染色液中几乎看不清凝胶时，可以认为已染色充分。染色2～4个小时或更长时间不会对最 终的染色效果产生负面影响。 3、 倒出染色液。染色液可以回收重复使用2～3次。 4、 加入适量脱色液，确保脱色液可以充分覆盖凝胶。推荐脱色液的配方是：40%乙醇，10% 乙酸，50％蒸馏水。 5、 置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温脱色4～24h。期间更换脱色液2～4次，直 至蓝色背景基本上全部被脱去，并且蛋白条带染色效果达到预期。通常蛋白条带在脱色1～ 2h后即可出现。 6、 完成脱色后把凝胶保存在水中，用于后续的拍照等。保存在水中的凝胶会发生溶涨。如 需避免溶涨，可以把胶保存在含20%甘油水溶液中，长期保存可以制备干胶。 (二) 快速染色脱色方法 1、 PAGE 电泳结束后取胶放入适量考马斯亮蓝染色液中，微波炉加热至接近沸腾或刚刚沸 腾，立即停止加热。通常对于胶浓度大于10％的胶比较坚韧，在发生煮沸时不易破损；对 于胶浓度小于10%的胶，宜尽量避免煮沸，以免出现胶碎裂的情况。 2、 随后在染色液温度较高的情况下，在室温摇床上摇动5～10min。 3、 倒出染色液。染色液可以回收重复使用2～3次。 4、 加入适量脱色液，确保染色液可以充分覆盖凝胶。推荐脱色液的配方是：40%乙醇，10% 乙酸，50％蒸馏水。 5、 微波炉加热至接近沸腾或刚刚沸腾，立即停止加热。 6、 随后在脱色液温度较高的情况下，在摇床上摇动5～10min。此时通常可以观察到比较 清楚的蛋白条带。 7、 更换新鲜的脱色液，重复步骤5和步骤6，直至蓝色背景基本上全部被脱去，蛋白条带 染色效果达到预期。 8、 完成脱色后，把凝胶保存在水中，用于后续的拍照等。保存在水中的凝胶会发生溶涨。 如需避免溶涨，可以把胶保存在含20%甘油水溶液中，长期保存可以制备干胶。 注意事项： 1、 染色时，如果把凝胶和染色液一起放置在微波炉中适当加热，可以大大加快染色速度。 但加热时宜尽量避免沸腾，以免出现因暴沸而导致的凝胶碎裂。 2、 脱色期间可以在脱色液中加入一片吸水纸，可以使部分染料吸附在吸水纸上，加快脱色。 脱色时间过长也会导致蛋白条带的颜色变浅。 3、 如果希望染色的背景更低，希望获得更加清晰的蛋白条带，可以加入适量的室温蒸馏水 进行洗涤。通过蒸馏水洗涤可以进一步降低背景。在4℃蒸馏水中浸泡过夜可以获得背景更 低，条带更清晰的条带。在次日对4℃蒸馏水浸泡过夜的已经进行了染色的凝胶再同前一天 一样进行染色和洗涤可以进一步改善染色效果，获得更好的考染蛋白条带。 4、 常规染色脱色方法耗时较长，但检测灵敏度更高，染色效果更加稳定。快速染色脱色方 法通常检测灵敏度略低，并且在微波炉加热的过程中有时会出现暴沸导致凝胶碎裂的情况， 需特别注意。另外微波炉加热导致的高温会引起染色液和脱色液中的乙酸的挥发。 5、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。