食品微生物检验技术 分离纯化技术 分离纯化微课视频.ppt

《食品微生物检验》 重庆化工职业学院 环境与质量检测学院 《食品质量与安全》精品课程系列 主讲人：黄月 菌种：酵母菌，大肠杆菌混合菌液 培养基：马铃薯葡萄糖琼脂培养基，牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 器皿：无菌培养皿，水浴锅，接种环，试管，移液管，涂布玻棒，生理盐水、标签纸 （一）融化培养基 （二）倒平板 （三）作分区标记 （四）划线操作 （一）制备样品稀释液 （二）倒平板 （三）涂布 （四）挑菌 1、为了取得好结果，应先在纸上练习划线动作，再用空白培养皿作模拟操作，待掌握划线要领后再正式划线，以提高成功率。 2、划线用的接种环，环柄宜稍长，环口宜圆滑，划线时环与平面之间的交角宜小，动作要轻巧，防止划破培养基。 3、平板不能浇的太薄，有条件的情况下，平板应使用前一天倒成，而且培养基不宜太烫，防止平板表面冷凝水太多，影响分离效果。 为什么在划完A区后要将环上的残菌烧死？划后边几区是否需要同样的处理？ 片头，PPT背景+音乐 * 解说词： 大家好！今天我们一起来学习微生物的分离纯化技术。（老师出镜+字幕+本页PPT） * 解说词： 在自然界中，存在各种各样的微生物，比如我们熟悉的细菌、真菌、藻类、放线菌、原生动物。这些微生物往往都是混杂在一起的，从混杂的微生物群中获得某一菌株的纯培物，即微生物的分离和纯化。（老师出镜+字幕+图片动画依次出现） 解说词： 要想获得某种微生物的纯培物，必须根据该微生物对营养、酸碱度、氧等条件要求不同，而供给它们适宜的生活条件，或加入某种抑制剂造成只利于此菌生长，而抑制其他菌生长的环境，从而淘汰其他杂菌，再通过各种分离纯化的方法，使它们在固体培养基上形成单菌落，从而得到纯菌株。（字幕+图片动画依次出现） 解说词： 下面我们学习微生物分离纯化的常用方法，这里介绍两种常用的分离纯化技术。（字幕+PPT图片动画） * 解说词： 本节课我们需要用到的实验材料包括菌种：酵母菌，大肠杆菌混合菌液；培养基：马铃薯葡萄糖琼脂培养基，牛肉膏蛋白胨琼脂培养基；器皿：无菌培养皿，水浴锅，接种环，试管，移液管，涂布玻棒，生理盐水、标签纸。（字幕+本页PPT） 解说词： 平板划线法是指用接种环以无菌操作蘸取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来。如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。其具体实验步骤包括（老师出镜+字幕）： 切换到拍摄视频。1.融化培养基：将马铃薯葡萄糖琼脂培养基放入水浴锅中加热至融化。 切换到拍摄视频。2.倒平板：待培养基冷却至50℃左右，按无菌操作法倒4只平板，（每皿15mL左右），平置，待凝固。 切换到拍摄视频。3.作分区标记：在皿底将整个平板划分为A、B、C、D四个面积不等的区域，区间的交角为120℃左右，以便充分利用整个平板的面积。 切换到拍摄视频。4.划线操作 （1）挑取菌种：选用平整、圆滑的接种环，按无菌操作法挑取少量菌种。 （2）划A区：将平板倒置在酒精灯旁，左手拿皿底并尽量使平板垂直于桌面，有培养基的一面面向酒精灯，右手拿接种环先在A区划3-4条连续的平行线。划完A区应立即烧掉环上的残菌，以免影响后续分离效果。 （3）划其他区：将烧掉残菌后的接种环在平板培养基边缘冷却一下，并使B区转移到上方，接种环通过A区将菌带到B区，随即划数条致密的平行线。烧掉环上的残菌，再从B区作C区的划线。再次烧掉环上的残菌，最后经C区作D区的划线，D区的线条应与A区的相平行，但划D区切勿接触与A、B区，以免影响单菌落的形成。烧掉接种环上的残菌。 （4）恒温培养；将划线平板倒置于恒温培养箱中，与28℃放置2-3天。 （5）挑选菌落：选择D区或C区典型的单菌落，分别移接到相应的斜面培养基上，经培养即得到纯种。 解说词： 稀释平板法是先将待分离的材料用无菌水做一系列的稀释(如1：10、1：100、1：1000、1：10000……)，吸取一定量的不同稀释液放入平板，用无菌涂棒在培养基表面轻轻涂布均匀。制成可能含菌的琼脂平板，保温培养一定时间即可出现菌落。如果稀释得当，在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落，这个菌落可能就是由一个细菌细胞繁殖形成的。随后挑取该单个菌落或重复以上操作数次，便可得到纯培养物。具体实验操作包括（老师出镜+字幕）： 切换到拍摄视频。1)制备样品稀释液。将样品原液振摇，使菌分散．然后用无菌吸管吸取Iml注入装有9ml无菌水的试管中，制成10-1的稀释液，然后依次类推制成10-2、10-3、10-4……的各种稀释样品溶液。 切换到拍摄视频。2)倒平板。将配好的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基加热熔化，待冷至55～60℃时，倒入培养皿中，每皿倒入15ml左右，加盖后轻轻摇动培养皿