干扰素制备的工艺流程1复习过程.ppt

干扰素的作用？ 一、抗增生作用：这是干扰素能用于治疗多种肿瘤的原因。二、抗病毒作用：当我们的机体感染病毒时，体内会产生大量的干扰素。三、免疫调节作用四、抗纤维化作用五、干扰素还有抗新血管增生、促进细胞凋亡等多种功能 干扰素是目前最主要的抗病毒感染和抗肿瘤生物制品。 · 干扰素的合成 一、基因工程菌的组建 1、如何构建基因工程菌？也就是DNA重组克隆单元操作步骤。 切、接、转、增、检 2、切之前还需要做什么？ 获取目的cDNA 1、干扰素cDNA的获得 产生干扰素的白细胞 全RNA 5%~23%蔗糖密度梯度离心提取12 S mRNA 12S mRNA 什么叫12 S mRNA？ 反转录成cDNA 寡dT—纤维柱 mRNA 接 目的cDNA 产 检 增 转 切 干扰素 2、基因工程菌的组建 pBR322质粒 抗性筛选？ 大肠杆菌K12 用已知干扰素DNA片段作为探针挑选 Tcr Apr Tcr Tcr 受体菌的抗性筛选 ?步骤一：将细菌涂布到含四环素的培养基上培养，就可得到质粒PBR322或重组质粒的细菌单菌落。??????????? 步骤二：若想进一步筛选出重组子，可采用负选择（详情请看《基因工程》P59）。 但由于生产中要用已知干扰素DNA片段作为探针挑选富有干扰素的cDNA克隆，所以不需要进行负选择。 二、基因工程干扰素的制备 制备基因工程ɑ-干扰素工艺流程如下： (P73) 启开种子 制备种子液 精提 粗提 发酵培养 半成品制备 半成品检定 分装 冻干 成品检定 成品包装 制备的过程及要求： （1）发酵 （2）产物提取纯化 （3）质量控制标准和要求（P74） *