微生物的培养.pdf

. 目 录 实验一 常用 培养基 的制备、灭菌与消毒 实验二 土壤中微生物分离纯化培养 实验三 菌种保藏 实验四 细菌形态观察及单染色 实验五 放线菌及霉菌形态观察 实验六 革兰氏染色及芽孢染色 实验七 酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定 实验八 微生物直接计数法及测微技术 实验九 大肠杆菌生长曲线的测定 实验十 水中细菌总数的测定 实验十一 细菌细胞的生化反应实验 实验十二 噬菌体 的分离、纯化及效价测定 实验一 常用培养基的制备、灭菌与消毒 一、实验目的 了解培养基的配制原理； 掌握配制培养基的一般方法和步骤； 了解常见灭菌、 清毒基本原理 及方法；掌握干热天菌、高压蒸汽灭菌及过滤除菌的操作方法。 二、实验原理 培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成 代谢产物 所需要的 营养物质 的混 合物。培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。根据微生物的种类和实 验目的不同，培养基也有不同的种类和配制方法。 牛肉膏蛋白胨 培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养 基。 由于这种培养基中含有一般 细胞生长 繁殖所需要的最基本的营养物质， 所以可供微生物 生长繁殖之用。 ;.. . 干热天菌、高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使 蛋白质变性 从而达到杀死微生物的效果。 三、试剂与器材 1.器材 试管、三角瓶、烧杯、 量筒 、玻璃棒、培养基、分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽 灭菌锅、 pH 度纸、棉花、牛皮纸、 记号笔 、麻绳、纱布、吸管、 培养皿 、电 烘箱 、注射器、 微孔滤膜过滤器、镊子等。 2. 试剂 牛肉膏、蛋白胨、 NaCl 、琼脂 四、实验内容 1.称量 →溶化 →调 pH→ 过滤 → 分装 →加塞 → 包扎 →灭菌 →无菌检查 2. 干热灭菌：装入待灭菌物品 →升温 → 恒温 → 降温 →开箱取物 3. 高压蒸汽灭菌： 加水 →装物品 →加盖 →加热 →排冷空气 →加压 →恒压 → 降压回零 →排汽 → 取物 →无菌检查 4. 过滤除菌：组装灭菌 →连接 →压滤 → 无菌检查 →清洗灭菌 五、关键步骤及注意事项 1.要严格按配方配制。 2. 调 pH 不要过头。 3.干热灭菌要注意物品不要堆放过紧，注意温度的时间控制， 70oC 以下放物、取物。 4. 高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零取物。 5. 过滤除菌要注意各部件灭菌， 压滤时， 压力要适当， 不可太猛太快， 滤膜要注意清洗保存。 实验二 土壤中微生物分离纯化培养 一、实验目的 掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化微生物的基本操作技术； 了解不同的微生物 菌落 在 斜面上、半固体培养基和液体培养基中的生长特征； 进一步熟练和掌握微生物 无菌操作 技术； 掌握微生物培养方法。 二、实验原理 从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。 常用的分离、 纯化方法： 单细胞挑取法， 稀释涂布平板法， 稀释混合平板法， 平板划线法 稀 释涂布平板法步骤： 倒平板－制备土壤污水稀释液－涂布－培养－挑菌落； 平板划线法步骤： 倒平板－标记培养基名称－划线。 三、试剂与器材 ;