临床微生物检验技术 第二节 细菌培养接种技术 第二节细菌培养与接种技术.ppt

一 、基本条件 二、 细菌接种与培养技术 一 、基本条件 接种环与接种针 红外接种环 培养皿 培养箱 培养基 培养基 由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养物制品。 （1）营养物质 蛋白胨 肉浸液及牛肉膏 糖（醇）类 血液 鸡蛋和动物血清 无机盐类 生长因子 蛋白胨：供给细菌氮源 特点 易溶于水 高温不凝固 含游离氨基酸，易被细菌利用 为两性电解质，有缓冲作用 遇酸不沉淀 肉浸液及牛肉膏 肉浸液：含氮物质少 牛肉膏：营养价值不及肉浸液，无糖 糖（醇）类 为细菌提供碳源、能量 生化试验 血液 增加营养 提供特殊生长因子 观察溶血 鸡蛋和动物血清 制备特殊培养基 凝固剂 无机盐类 构成菌体成分 作为酶的组成部分，维持酶活性 能量的储存、转运 调节菌体内外渗透压 与细菌致病作用有关 生长因子 B族维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶 特殊生长因子：X因子、V因子 （2）水分 75～80% 蒸馏水、离子水 （3）凝固物质 琼脂：无营养价值；最常用的凝固剂，98℃以上时溶于水，45℃以下凝固 明胶：营养价值不大；24 ℃以上溶解， 20℃以下凝固；明胶液化试验 （4）抑制剂 胆盐、煌绿、亚碲酸钾、抗生素等 选择培养基 （5）指示剂 酸碱指示剂：酚红、甲基红、中性红、溴甲酚紫、溴麝香草酚蓝、中国蓝等 氧化还原指示剂：美兰、刃天青 按用途分类 基础培养基：培养营养要求不高的细菌，如普通平板 营养培养基：能满足营养需求较高细菌的生长，如血平板 鉴别培养基：含有某些特定的底物，用于鉴别细菌，如克氏双糖培养基（KIA） 选择培养基：具有选择性抑制作用，用于选择性的培养目的菌，如SS平板 增菌培养基：促进目的菌的生长，适用于含菌量较少的标本，如葡萄糖肉汤。 厌氧培养基：用于培养厌氧菌 分离培养基的选择 依据卫生部临床检验中心推荐，应备有 如下分离培养基： 1．血平板 2．巧克力血平板 3．中国蓝平板或伊红美蓝平板 4．麦康凯平板 5．SS琼脂 三、培养基的制备 二 细菌接种于培养技术 （二）细菌的接种与分离技术 培养一般采用35℃，18-24h，但有时需根据菌种及培养目的作最佳选择 细菌接种的基本程序 1.平板划线法：使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌落，以便获得纯菌 2.琼脂斜面接种法 3.穿刺接种法:用于观察细菌动力 4.液体培养基接种法 5.倾注平板法:用于细菌计数 6.涂布接种法 1.平板划线法 1)分区划线法：适用于含菌量较多的标本 2)连续划线法：适用于含菌量较少的标本 分区划线法 连续划线法 （三）细菌的培养方法 三、细菌的生长现象 （一）固体培养基 菌落：单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形成单一肉眼可见的细菌集团。 ★菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性 ★菌落类型：光滑型（S）、粗糙型（R）、黏液型（M） 菌苔：多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。 （二）液体培养基 混浊 沉淀：多见于链状排列的细菌 菌膜：多见于需氧菌 细菌在液体培养基中的生长现象 （三）半固体培养基 有鞭毛细菌：在培养基中沿穿刺线并向外扩散生长，穿刺线边缘模糊。 无鞭毛细菌：只沿穿刺线生长，穿刺线边缘清晰。 菌落（固体培养基） 光滑型菌落 粗糙型菌落 粘液型菌落 表面生长 均匀混浊生长 沉淀生长 液体培养基中的生长情况 菌膜 菌沉淀 均匀浑浊 对照 * * 第二节 细菌接种与培养技术 1、 培养基的主要成分及其作用 （1）营养物质 （2）水分 （3）凝固物质 （4）抑制剂 （5）指示剂 2、培养基的分类 基础培养基 营养培养基 选择培养基 SS培养基 鉴别培养基 增菌培养基：液体培养基 特殊培养基：厌氧培养基、细菌L型培养基等 液体培养基：增菌 固体培养基： 1.5%-2.0%琼脂，分离、鉴定、药敏 半固体培养基：0.3%-0.5%琼脂，动力、保存菌种 （2）性状 （1）用途 调配 溶化 矫正pH 过滤澄清 分装 灭菌 检定 保存 程序 培养基灭菌 ★ 基础培养基：121℃高压蒸汽灭菌15分钟 ★ 含糖培养基：113 ℃灭菌15分钟 ★ 鸡蛋、血清培养基：间歇灭菌3天3次 ★ 不耐高温的液体成分：滤过除菌 （一）无菌技术 细菌检验的操作需在无菌室或超净工作台内进行 无菌室、超净工作台使用前后需进行消毒 细菌检验使用的物品使用前后需严格灭菌 标本的采集 无菌试管、烧瓶的使用 灭菌接种环 沾取标本 接种