色谱检测技术及应用 衍生化技术 衍生化技术.ppt

色谱检测技术及应用 目的 通过化学反应将样品中难于分析检测的（A）定量地转化成另一种易于分析检测的化合物（B），通过后者的分析检测可以对目标化合物进行定性和（或）定量分析. 柱前衍生化 柱后衍生化 柱前衍生化 样品制成适当的衍生物在进入色谱柱进行分离检测 便于色谱检测，如高沸点、不气化或热不稳定物质用气相色谱分析 提高检测灵敏度（降低检测限），加含紫外吸收基团（UV）或加卤素基团（ECD） 改变化合物的色谱性能，改善分离度，难分离物质，使其中一个衍生化而差异增强，进行分离 帮助化合物结构的鉴定 GC—改善目标化合物的挥发性 HPLC、TLC--- 改善检测能力 方法和试剂略有不同 柱后衍生化 样品先进入色谱柱，经分离，各个组分从色谱柱流出后，与衍生化试剂反应，在一定反应条件下，生成具有某种检测特性的产物，再进入检测器，得到检测信号 提高检测的灵敏度（降低检出限） 辅助化合物结构鉴定 条件 柱前衍生化 迅速，定量，重现性好，易操作 选择性高 产物一种，副产物及过量衍生化试剂不干扰分离与检测 衍生化试剂方便易得，通用性好 柱后衍生化 反应与色谱分离条件须适应 将待测物转化为可检测的衍生物 反应迅速 流程： 进样 HPLC 衍生化 检测 气相色谱柱前衍生化 硅烷化衍生化—GC中应用最多，提高质子化化合物（醇、酚、酸、胺、硫醇等）的挥发性 酯化衍生化– 有机酸，酯化方法甲醇法、重氮甲烷法，三氟乙酸酐法 酰化衍生化—降低羟基、氨基、巯基，P136反应公式 卤化衍生化—引入卤原子，使用ECD检测 高效液相色谱柱前衍生化 紫外衍生化，使没有紫外吸收或紫外吸收很弱的化合物能被紫外检测器检测，引入有强紫外吸收的基团，P137 荧光衍生化 电化学衍生化 手性衍生化 固定化酶反应器（IMER） 紫外衍生反应 在液相色谱中，紫外吸收检测器是最常见的一种高灵敏度检测器。但很多化合物在紫外可见光谱区无吸收，而不能被检测。将它们与带有紫外吸收基团的衍生化试剂在一定条件下发生化学反应，使反应产物带有发色基团而能被仪器检测 微量有机合成，选择反应产率高，重复性好的反应 过量试剂和杂质若干扰色谱分析和检测，则要进行纯化分离 常用的紫外衍生反应 苯甲酰化反应：对硝基苯甲酰氯、3,5-二硝基苯甲酰氯和对甲氧基苯甲酰氯与胺、醇、酚类化合物反应，生成强紫外吸收的苯甲酸酯类衍生物 2,4-二硝基氟代苯反应：与大多数伯胺、仲胺和氨基酸反应，生成强紫外吸收的苯胺类衍生物 苯基异硫氰酸酯的反应：与氨基酸、醇类反应 苯基磺酰氯的反应：与伯胺、仲胺反应 有机酸的酯类反应：有机酸与酰溴基试剂反应成酯 羰羟基化合物的反应：醛类、酮类的羰基与2,4-二硝基苯肼反应，生成苯腙衍生物；与对硝基苄基羟胺反应。 荧光衍生反应 在液相色谱中，荧光检测器是一种高灵敏度、高选择性的检测器，比紫外检测器的灵敏度要高10-1000倍。因此，可以检测痕量非荧光物质，常将它与荧光衍生化试剂反应，生成荧光物质，用荧光检测器检测 衍生化的荧光波长范围与荧光试剂和副产物不同， 荧光衍生反应不需纯化衍生物，课直接进样 电化学衍生化 指样品与某些试剂反应，生成具有电化学活性的衍生物，以便在电化学检测器上有较高的相应。 环境介质对电化学反应有较大影响，如离子强度，pH值和溶剂组成等 常用电化学衍生化试剂 还原衍生试剂 如带硝基的芳香化合物 氧化衍生试剂 如芳氨基、酚羟基 手性衍生化 用手性试剂与外消旋体反应，在分子内导入另一手性中心，柱前衍生反应生成一对非对映异构体，两者间无镜相关系，物理化学性质不同，可用常规的色谱分离条件进行分离 应用范围 不宜直接拆分，如游离胺类在手性固定相上往往呈较弱的色谱性质，生成中性化合物则获得显著改善 添加某些基团，可增加色谱系统的对映异构选择性 提高紫外或荧光检测的效果 固定化酶反应器（IMER） 特异性化学反应 试剂重复使用 高效液相色谱柱后衍生化 毛细管式柱后反应器 空气分割式柱后反应器 填充管式反应器 氨基酸分析仪 固相化学衍生化 化学固相反应剂 与仪器直接相接，易于实现自动化 固定化酶 前述都为液液反应方式，操作繁琐、费时 以硅胶或高分子小球为基体，在其表面结合一种反应剂，填装在短管中，当样品液体通过反应管时就可发生各种化学反应，如还原、氧化、基团转移和催化等 案例 柱前衍生化-HPLC测定田参氨基酸胶囊中10种氨基酸的含量.pdf 13种氨基酸和牛磺酸的柱前衍生化HPLC测定.pdf 衍生化技术在环境分析中的应用.pdf 衍生化操作辅助仪器 微量进样针 移液枪 /v_show/id_XNTQ4NzYyNzIw.html /v_show/id_XNTcwMjI5NDgw.html