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大蒜细胞SOD酶的提取和分离
大蒜细胞SOD酶的提取和分离
大蒜细胞SOD酶的提取和分离
产品简介
一、产品简介
SOD是Super Oxide Dismutase 缩写,中文名称超氧化物歧化酶,是生物体内重要的抗氧化酶,广泛分布于各种生物体内,如动物,植物,微生物等。SOD具有特殊的生理活性,是生物体内清除自由基的首要物质。
SOD在生物体内的水平高低意味着衰老与死亡的直观指标;现已证实,由氧自由基引发的疾病多达60多种。它可对抗与阻断因氧自由基对细胞造成的损害,并及时修复受损细胞,复原因自由基造成的对细胞伤害。由于现代生活压力,环境污染,各种辐射和超量运动都会造成氧自由基大量形成;因此,生物抗氧化机制中SOD的地位越来越重要。
大蒜细胞SOD酶的提取和分离
产品简介
SOD类型:超氧化物歧化酶按其所含金属辅基不同可分为三种:
第一种是含铜(Cu)锌(Zn)金属辅基的称(Cu.Zn—SOD),最为常见的一种酶,呈绿色,主要存在于机体细胞浆中;
第二种是是含锰(Mn)金属辅基的称(Mn—SOD),呈紫色,存在于真核细胞的线粒体和原核细胞内;
第三种是含铁(Fe)金属辅基的称(Fe—SOD),呈黄褐色,存在于原核细胞中。
大蒜细胞SOD酶的提取和分离
产品简介
二、产品用途
1、药物类:主要集中在炎症病患者,尤其治疗类风湿关节炎、慢性多发性关节炎、心肌梗塞、心血管病、肿瘤患者以及放射性治疗炎症病患者;
2、生化制药:作为一种生化酶制剂,广泛应用于临床和科研上,可抗衰老,抗肿瘤、调节人体内分泌系统;
3、化妆品:可添加在化妆品中,具有抗氧化抗腐蚀的优良性能。以SOD为主要成份的化妆品风靡世界,引发了化妆品历史上的一场革命,使人类永葆青春美丽梦想成真;
保健食品、饮料:SOD糖、SOD口服液、SOD干啤等都非常畅销。在饮料、糖果、糕点等食品中加入SOD既可利用其抗腐蚀性延长保质期,又可调节人体内分泌系统。
大蒜细胞SOD酶的提取和分离
实训目标
1.掌握有机溶剂沉淀法的原理和基本操作。
2.掌握SOD酶提取分离的一般步骤。
大蒜细胞SOD酶的提取和分离
实训原理
超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)是一种具有抗氧化、抗衰老、抗辐射和消炎作用的药用酶。它可催化超氧负离子(O2-)进行岐化反应,生成氧和过氧化氢。大蒜蒜瓣和悬浮培养的大蒜细胞中含有较丰富的SOD,通过组织和细胞破碎后,可用pH7.8的磷酸缓冲液提取出来。由于SOD不溶于丙酮,可用丙酮将其沉淀析出。
有机溶剂沉淀的原理是有机溶剂能降低水溶液的介电常数,使蛋白质分子之间的静电引力增大。同时,有机溶剂的亲水性比溶质分子的亲水性强,它会抢夺本来与亲水溶质结合的自由水,破坏其表面的水化膜,导致溶质分子之间的相互作用增大而发生聚集,从而沉淀析出。
大蒜细胞SOD酶的提取和分离
实训试剂与设备
一、试剂和材料
新鲜蒜瓣,0.05mol/L磷酸缓冲溶液(pH7.8),氯仿-乙醇混合液(氯仿-无水乙醇3:5),丙酮(用前预冷至-10℃)。
二、实验器材
研钵,石英砂,烧杯(50mL),玻璃棒,pH计,冷冻离心机,离心管。
大蒜细胞SOD酶的提取和分离
生产实训
一、生产前准备
1、检查生产原料、各种生产用试剂;
2、检查生产设备;
3、检查生产记录等文件。
二、生产操作
1、磷酸缓冲液制备粗酶液:将蒜瓣去外膜,于搅拌机中搅拌10min后移至研钵中研磨至蒜泥状,加入3倍体积( mL /mg)的磷酸缓冲液,浸泡 30~ 45min后用 6层纱布抽滤。 将滤渣再用 2倍磷酸缓冲液浸泡 30min后, 6层纱布抽滤。如此反复共3次,收集3次抽滤所得滤液。
2、采用热变性法对粗酶液进行粗提:将大蒜中 SOD酶液于 60℃热处理 20min , 8 500r /min离心 10min ,弃沉淀, 取上清液。
大蒜细胞SOD酶的提取和分离
生产实训
3、采用丙酮沉淀法进行分离纯化:将酶液置于冰浴中,加入- 18℃预冷的丙酮,搅拌 10min,于 4500r/min离心 15min,弃上清液,用50mmol /L磷酸缓冲液溶解其沉淀后,透析磷酸缓冲液, 4℃ 过夜,4500 r/min离心 10min ,测定上清液的 SOD酶活力。
大蒜细胞SOD酶的提取和分离
产品检测
一、检测原理
邻苯三酚在酸性环境中稳定,但在弱碱性环境中会发生自氧化反应,邻苯三酚在自氧化时只接受一个电子生成超氧阴离子 自由基(O2+O2一 ),并在其自氧化 过程
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