临床输血检验技术、社会服务模块 四项病原学标志物的核酸检测、技术文档 样本制备、核酸提取和扩增反应板制备标准操作规程.doc

襄阳市中心血站 操作规程 版本：6 修改状态：0 文件编号：XBC/SOP-SL-37 生效日期：2016年1月1日 文件名称：样本制备、核酸提取和扩增反应板制备标 准操作规程 第 PAGE 3 页 共 NUMPAGES 3页 受控状态：受控 控制编号： 样本制备、核酸提取和扩增反应板制备标准操作规程 1 目的 规范核酸检测过程中的样本制备、核酸提取和PCR反应板的制备，确保扩增前过程准确。 2 适用范围 核酸实验室标本制备区（二）进行的HBV DNA、HCV RNA、HIV RNA PCR扩增前过程。 3 职责 核酸检测人员负责标本准备、标本汇集、核酸提取和PCR反应板建立。 4 实施程序 4.1 环境要求：符合二级生物安全实验室条件。实验室温度：18-30℃；湿度30-85%。试剂储存和配制区（一）空气压力为常压，标本制备区（二）空气压力为常压-5 Pa，扩增及产物分析区（三）空气压力为常压-10Pa。 4.2 操作前的准备工作 4.2 打开排风装置（开机顺序：先扩增检测室后标本制备室。关机顺序与此相反）检查室内压力是否达预定值。 4.2 查看UPS工作状态，打开STAR控制电脑和STAR、生物安全柜。 4.2 检查试剂冰箱以及试剂盒的状态。 4.3 标本挑拣 4.3 软件系统挑拣：进入唐山现代SHINOW 9.0系统，点击标本挑选菜单下的核酸标本，选取合适的检测时间，勾选含实验结束，点击查询，在献血码处扫描样本条码。 4.3.2 手工挑拣：集中化检测样本未录入唐山系统，根据委托方提供的检测结果信息，手工将酶免、ALT待查、不合格样本挑出，分类放置。唐山信息系统故障时本实验室样本也执行手工挑拣操作。 4.3. 根据样本的不同状态（待查、合格、不合格、手工放行）将样本挑选出来并分开放置。合格标本和血小板样本放到生物安全柜中进行4.5.1操作，待查标本放入待查冰箱，不合格标本放入-20℃冰箱暂存 4.4 试剂准备按《STAR全自动样本处理系统使用和维护标准操作规程》操作。 4.5 样本准备 4.5 在生物安全柜中依次去除样本管管盖并按顺序摆放到32孔样本载架上（摆放顺序依次为混检样本、单检样本）。开盖时轻拿轻放，保持手套干净，防止样本交叉污染。 4.5 根据POOL数将相应数量汇集管摆放到32孔样本载架上，并去除管盖。 4.5 将样本载架按50通道→27通道的顺序放置在STAR上，汇集管按1通道→3通道的顺序放置。 4.5 样本汇集按《STAR全自动样本处理系统使用和维护标准操作规程》操作。 4.6 核酸提取按《TBG全自动核酸提取仪使用及维护标准操作规程》操作。 4.7 PCR反应板的建立按《STAR全自动样本处理系统使用和维护标准操作规程》操作。 4.8 将制备好的PCR反应板转移至扩增及产物分析区（三），待扩增。 4.9 清洁和消毒按《实验室清洁消毒标准操作规程》操作。 4.10 注意事项 4.10.1 在实验操作过程中要勤换手套，尤其在接触样本后必须及时更换手套。 4.10.2 打开已知阳性样本前，一定要先离心，防止开盖时液体溅出造成污染，使用后要将阳性样本加盖后按照《样本处理操作规程》处理。 4.10.3 PCR扩增管进行扩增前必须盖紧管盖，不能留有缝隙。 5 相关文件 《STAR全自动样本处理系统使用和维护标准操作规程》 《TBG全自动核酸提取仪使用及维护标准操作规程》 《实验室清洁消毒标准操作规程》 《样本处理操作规程》 6 记录表单 无 编写人: 董江超 审核人： 释艳华 批准人： 杨青成