提取细胞全蛋白操作方法.doc

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2020-09-06 发布于浙江
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细胞全蛋白提取步骤 ①吸取培养基，预冷PBS清洗细胞三次，细胞刮刮脱细胞，收集至离心管，1000rpm离心5分钟。洗涤后的细胞转移至洁净EP管， ②冰上操作，配制细胞裂解液，1ml Lysis,Buffer中加入10 μl磷酸酶抑制剂、1 μl蛋白酶抑制剂、5μl 100mM的PMSF。混匀后冰上保存数分钟待用。 ③在洗涤好的细胞中按照每107个细胞加入1ml细胞裂解液的比例，加入细胞裂解液。200μl移液器反复吹打，至蛋白析出。 ④4℃摇床，温和振摇15分钟。 ⑤14000rpm，4℃离心15分钟，上清即为细胞全蛋白提取物。 ⑥BCA法测蛋白浓度。蛋白分装后保存于-70℃冰箱，避免反复冻融。提取细胞全蛋白整个过程中所有使用的物品及试剂均需预冷，防止蛋白降解。