（优质医学）紫外分光光度计的使用原理和方法.ppt

二、朗伯-比尔定律 朗伯-比尔定律：当一束平行单色光通过含有吸光物质的稀溶液时，溶液的吸光度与吸光物质浓度、液层厚度乘积成正比，即 A= κ cl 式中比例常数κ与吸光物质的本性，入射光波长及温度等因素有关。c为吸光物质浓度，l为透光液层厚度。 朗伯-比尔定律是紫外-可见分光光度法的理论基础。 * 三、吸光系数 当l以cm，c以g/L为单位，κ称为吸光系数，用 a表示。 A= a cl a的单位为L/(g.cm) * 当l以cm，c以mol/L为单位，κ称为摩尔吸光系数，用 ε表示。 ε的单位为L/mol.cm，它表示物质的浓度为1mol/L，液层厚度为1cm时，溶液的吸光度。 摩尔吸光系数 * 比吸光系数 比吸光系数是指百分含量为1%， l为1cm时的吸光度值，用 表示。 * 四、偏离朗伯-比耳定律的因素 （1）入射光为非单色光 （3）光程的不一致性。 光源不是点光源，比色皿光径长度不一致，光学元件的缺陷引起的多次反射等，均造成光径不一致，从而与定律偏离。 （2）溶液的不均性。 实际样品的混浊，加入的保护胶体，蒸馏水中的微生物，存在散射以及共振发射等，均可吸光质点的吸光特性变化大。 * §3. 紫外-可见分光光度计 一、主要部件的性能与作用 基本结构: 光源→单色器→吸收池→检测器→信号显示系统 ↑ 样品 * 在紫外可见分光光度计中，常用的光源有两类：热辐射光源和气体放电光源 1 光源 热辐射光源用于可见光区，如钨灯和卤钨灯；气体放电光源用于紫外光区，如氢灯和氘灯。 * 单色器的主要组成：入射狭缝、出射狭缝、色散元件和准直镜等部分。 2 单色器 单色器质量的优劣，主要决定于色散元件的质量。色散元件常用棱镜和光栅。 * 吸收池又称比色皿或比色杯，按材料可分为玻璃吸收池和石英吸收池，前者不能用于紫外区。 3 吸收池 吸收池的种类很多，其光径可在0.1~10cm之间，其中以1cm光径吸收池最为常用。 * 4 检测器 检测器的作用是检测光信号，并将光信号转变为电信号。现今使用的分光光度计大多采用光电管或