微生物发酵技术 微生物发酵技术 5.4天冬酰胺酶的发酵生产.ppt

单元五 药用酶的发酵生产 项目一 药用酶基本知识 项目二 微生物发酵产酶 项目三 酶的分离纯化 项目四 天冬酰胺酶的发酵生产 一、天冬酰胺酶基本知识 1.天冬酰胺酶的抗肿瘤作用 L－天冬酰胺酶（L-asparaginase）是酰胺基水解酶。能专一地催化天冬酰胺水解形成L－天冬氨酸和氨，是一种抗肿瘤酶，用于治疗白血病，其商品名称为Elspar 一、天冬酰胺酶基本知识 2.天冬酰胺酶的结构与性质 天冬酰胺酶呈白色粉末状，微有湿性，溶于水，不溶于丙酮、三氯甲烷、乙醚和甲醇。 水溶液20℃储存7d，5℃储存14d均不减少酶的活力。干品50℃、15min酶活力降低30％，60℃、1h内失活， 最适pH8.5，最适温度37℃。 3.生产菌种 L-天冬酰胺酶的产生菌有大肠杆菌、粘质赛氏杆菌、软腐病欧氏杆菌、铜绿色极毛杆菌等，但只有大肠杆菌的天冬酰胺酶活性较高。 我国中科院微生物研究所采用大肠杆菌AS1.357为菌种生产L-天冬酰胺酶制品。 4.发酵生产流程 二、天冬酰胺酶的发酵生产 1.种子制备 ①菌种培养 采用大肠杆菌ASI.375，普通牛肉膏培养基，接种后于37℃培养24h。 ②种子培养 16%玉米浆，接种量1%～1.5%，37℃温度，通气搅拌培养4～8h。 2.发酵工艺控制 玉米浆培养基，接种量8%，37℃通气搅拌培养6～8h。 三、门冬酰胺酶的提取和精制 1.离心分离发酵液，得菌体，加2倍量丙酮搅拌，压滤，滤饼过筛，自然风干成菌体干粉。 2.提取、沉淀、热处理。 3.门冬酰胺酶的提取和精制