中药制剂分析技术 高效液相色谱鉴别法、高效液相色谱法 高效液相色谱法.ppt

六、应用举例——胃舒宁颗粒中甘草酸含量的测定 【处方】 甘草595g 海螵蛸595g 白芍464g 白术310g 延胡索310g 党参119g 本品每袋含甘草以甘草酸（C42H62O16）计不得少于20mg。 为什么选择甘草酸为指标性成分？ 课堂活动 供试品溶 液的制备 对照品溶 液的制备 高效液相色谱检测 含量计算 （二）藿香正气水中厚朴酚与和厚朴酚总量的测定 （1）色谱条件与系统适用性试验（略） （2）对照品溶液的制备 取厚朴酚、和厚朴酚对照品适量，精密称定，分别加甲醇制成每1ml含厚朴酚0.2mg、和厚朴酚0.1mg的溶液，即得。 （3）供试品溶液的制备 精密量取本品5ml，加盐酸2滴，用三氯甲烷振摇提取3次，每次10ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，精密量取5ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 （4）测定法 精密吸取上述三种溶液各10μl，分别注入液相色谱仪测定，根据对照品的峰面积（AR厚=140341、 AR和=156699）以及供试品中被测成分的峰面积（Ax厚=63154、 Ax和=94020）计算厚朴的含量。本品每支含厚朴以厚朴酚（C18H18O2）及和厚朴酚（C18H18O2）的总量计，不得少于5.8mg。 （5）判断 根据（4）中给出的数据计算每支样品中厚朴酚（C18H18O2）及和厚朴酚（C18H18O2）的总量，判断含量是不是合格。（藿香正气水标示装量为每支10ml） 厚朴酚的含量 和厚朴酚的含量 厚朴+和厚朴酚的总量 =3.6mg/支+2.4mg/支=6.0 mg/支＞5.8 mg/支 该批藿香正气水的含量测定符合规定。 1. 高效液相色谱法是采用高压输液泵将流动相泵入装有填充剂的色谱柱进行分离并测定含量的方法。 2. 具有分离效能高、选择性好、灵敏度高、分析速度快、适用范围广、流动相选择性大、流出组分易收集、色谱柱可反复使用等特点，对于挥发性低、热稳定性差、分子量大、离子型化合物尤为适宜 3. 高效液相色谱仪一般由高压输液系统、进样系统、色谱分离系统、检测系统和数据处理系统组成。 点滴积累 高效液相色谱法 Shandong College of Traditional Chinese Medicine 1. 定义 高效液相色谱法（HPLC）是采用高压输液泵将流动相泵入装有填充剂的色谱柱进行分离并测定含量的方法。 2. 特点 分离效能高、选择性好、灵敏度高、分析速度快、适用范围广（供试品不需气化，只需制成溶液即可）、流动相选择性大、流出组分易收集、色谱柱可反复使用等特点 。 3. 范围 挥发性低、热稳定性差、分子量大、离子型化合物 。 一、仪器工作原理 （一）仪器的构造 高压输液系统 色谱分离系统 数据处理系统 进样系统 检测系统 高效液相色谱仪的构造 高效液相色谱仪 1.贮液罐 2.脱气装置 3.梯度洗脱 4.高压输液泵 5.流动相流量显示 6.柱前压力表 7.输液泵头 8.过滤器 9.阻尼器 10.进样装置 11.色谱柱 12.检测器 13.数据处理系统 14.废液贮罐 1. 高压输液系统 由贮液罐、脱气装置、高压输液泵、过滤器、梯度洗脱装置等组成。 （1）贮液罐：由玻璃、不锈钢或氟塑料等化学惰性、耐腐蚀材料制成，有无色及棕色两种贮液罐。 （2）脱气装置：贮液瓶配有抽真空及吹入惰性气体的脱气装置。 ①超声波振动脱气；②抽真空脱气；③加热回流脱气；④吹氦脱气；⑤真空在线脱气。 （3）高压输液泵：完成流动相的输送任务。 （4）过滤器：在流动相进入色谱柱之前，用于除去流动相中固体颗粒杂质的直径为0.45μm滤膜装置。 （5）梯度洗脱系统：可分为高压与低压两种梯度洗脱装置。 2. 进样系统 进样器有高压进样阀、六通手动进样阀及自动进样器等装置。 六通进样阀 3.色谱分离系统 色谱分离系统由保护柱、色谱柱、恒温装置和连接阀等组成。 4.检测系统 高效液相色谱检测器通常分为两类：通用性检测器和选择性检测器。 紫外检测器（UV）：使用最广范的选择性检测器 荧光检测器（FD） 电化学检测器（ ECD） 蒸发光散射检测器（ELSD） 示差折光检测器（RID） 4.检测系统 高效液相色谱检测器通常分为两类：通用性检测器和选择性检测器。 紫外检测器（UV）：使用最广范的选择性检测器 荧光检测器（FD） 电化学检测器（ ECD） 蒸发光散射检测器（ELSD） 示差折光检测器（RID） 5.