微生物应用基础 大肠菌群数的测定 6.2 大肠菌群总数的测定.pptx

第二节 大肠菌群总数的测定 大肠菌群最近似数的测定大肠菌群:coliforms最近似数:most probable number,MPN 概念：大肠菌群系指一群在37℃ 24h能 发酵乳糖产酸产气，需氧或兼性 厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌， 包括肠杆菌科的埃希氏菌属、柠 檬酸细菌属、克雷伯氏菌属、肠 杆菌属。 单位：MPN/100mL（g）一、实验目的1.掌握大肠菌群最近似数检验技术的要点2. 学会发酵法检验大肠菌群最近似数二、实验器材样品37℃恒温培养箱、接种环、酒精灯、试管架、记号笔等培养基三、方法1、样品及其稀释（同细菌总数测定）2、接种乳糖胆盐发酵管（3×3=9支）3、鉴别培养（伊红美兰）4、乳糖复发酵试验1. 采样:无菌操作2. 初发酵试验：吸取待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，10ml接种量采用双料发酵管，而lml及lml以下接种量采用单料管。每一接种量接种3管，置于35～37℃培养24士2h。将产酸、产气的发酵管按下列程序继续进行检验。3. 分离培养：将产气的发酵管中的发酵液在EMB平板上划线分离，置于35～37C培养18 ～ 24h 革兰氏染色及镜检：于上述平板上长出的菌落中挑取1～2个大肠菌群可疑菌落进行镜检和革兰氏染色4. 复发酵试验：将上述镜检之菌 落同时接种于乳糖发酵管，置 于35 ℃ ～37℃培养24土2h，观察 产气情况。四、结果报告 凡是在乳糖胆盐发酵管产酸、产气，在指示性培养基上能生长的，革兰氏染色为阴性的无芽抱杆菌，在复发酵管中产酸、产气的，即说明有大肠菌群的细菌存在—大肠菌群阳性； 有一项不符的，即说明无大肠菌群的细菌存在—大肠菌群阴性。 根据有大肠杆菌细菌存在的初发酵管的管数，查相应的大肠杆菌检索表，报告每100毫升待检样品中大肠菌群细菌的最近似数。谢谢观看