分子生物学简答题整理的重点.docVIP

1、简单描述大肠杆菌乳糖操纵子的结构及转录过程。?答：结构基因：β—半乳糖苷酶基因（lacZ）、编码β—半乳糖苷透性酶的基因（lacY）、β—半乳糖苷转乙酰酶基因（lacA）。过程：乳糖操纵子调控是当培养基中没有乳糖时，存在于操纵子上游的调节基因编码表达的阻遏蛋白结合到操纵子中的操纵基因上，阻止了结构基因的表达。此时，在细胞中只有几个β—半乳糖苷酶分子，但将大肠杆菌转到乳糖培养基中时，由于诱导物分子结合在阻遏蛋白的特异部位，引起阻遏蛋白构象改变，不能结合到操纵基因上，使RNA聚合酶能够正常催化转录存在于操纵子上的结构基因，即操纵子被诱导表达，β—半乳糖苷酶分子数量迅速增加，在这个系统中的诱导物分子不是乳糖本身，而是乳糖的同分异构体—异乳糖。因为乳糖进入大肠杆菌细胞后被转化成了异乳糖。 2根据广义基因病概念，可将人类疾病分成哪三类,第一类为单基因病。属于单基因病的如多指症、白化病、早老症等。第二类为多基因病。如高血压、冠心病、糖尿病、哮喘病、骨质疏松症、神经性疾病、原发性癫痫、肿瘤等。第三类为获得性基因病。这类疾病由病原微生物通过感染将其基因入侵到宿主基因引起。 3、简要说出原核生物mRNA与真核生物mRNA的区别。? 答：1从原核生物来说，mRNA是多顺反子，寿命短，翻译是偶联的，所以合成出来的RNA不需加工；真核生物mRNA是单顺反子，寿命长，mRNA转录出来是前体，需加工，且在细胞核中合成，再进入细胞质，不是偶联的。2原核生物mRNA的5′端在起始密码上有SD序列与翻译起始有关，而真核生物mRNA没有。3真核生物mRNA的5′端有帽子3′端有PolyA尾，而原核生物mRNA没有。4原核生物mRNA没有内含子，而真核生物mRNA有内含子，需加工变成成熟的mRNA。 5，什么是DNA变性？DNA变性后理化性有何变化 DNA 双链转化成单链的过程成变性.引起 DNA 变性的因素很多,如高温,超声波,强酸,强碱,有机溶剂和某些化学试剂(如尿素,酰胺)等都能引起变性. DNA 变性后的理化性质 变化主要有: (1)天然 DNA 分子的双螺旋结构解链变成单链的无规则线团,生物学活性丧失; (2)天然的线型 DNA 分子直径与长度之比可达 1:10,其水溶液具有很大的黏度.变性后, 发生了螺旋-线团转变,黏度显著降低; (3)在氯化铯溶液中进行密度梯度离心,变性后的 DNA 浮力密大大增加; (4)沉降系数 S 增加; (5)DNA 变性后,碱基的有序堆积被破坏,碱基 被暴露出来,因此,紫外吸收值明显增加,产生所谓增色效应. DNA 分子具旋光性,旋 光方向为右旋.由于 DNA 分子的高度不对称性,因此旋光性很强,其[ a ]=150.当 DNA 分子 变性时,比旋光值就大大下降. 6简述聚合酶链式反应PCR的基本原理及应用 类似于DNA的天然复制过程①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③ 7葡萄糖对lac操作子表达的抑制是间接地，我们说不是葡萄糖而是它的某些降解产物抑制lac mRNA的合成。科学家把葡萄糖的这种效应成为代谢阻遏效应 8什么是核酸的分子杂交？与之相关的技术有哪些？有何应用价值 核酸的分子杂交(molecular?hybridization)技术是目前生物化学和分子生物学研究中应用最广泛的技术之一，是定性或定量检测特异RNA或DNA序列片段的有力工具 核酸探针的制备，杂交膜的准备，固相杂交反应? 9糖操纵子的作用机制？ 答：1、乳糖操纵子的组成：大肠杆菌乳糖操纵子含Z、Y、A三个结构基因，分别编码半乳糖苷酶、透酶和半乳糖苷乙酰转移酶，此外还有一个操纵序列O，一个启动子P和一个调节基因I。 2、阻遏蛋白的负性调节：没有乳糖存在时，I基因编码的阻遏蛋白结合于操纵序列O处，乳糖操纵子处于阻遏状态，不能合成分解乳糖的三种酶；有乳糖存在时，乳糖作为诱导物诱导阻遏蛋白变构，不能结合于操纵序列，乳糖操纵子被诱导开放合成分解乳糖的三种酶。所以，乳糖操纵子的这种调控机制为可诱导的负调控。 3、CAP的正性调节：在启动子上游有CAP结合位点，当大肠杆菌从以葡萄糖为碳源的环境转变为以乳糖为碳源的环境时，cAMP浓度升高，与CAP结合，使CAP发生变构，CAP结合于乳糖操纵子启动序列附近的CAP结合位点，激活RNA聚合酶活性，促进结构基因转录，调节蛋白结合于操纵子后促进结构基因的转录，对乳糖操纵子实行正调控，加速合成分解乳糖的三种酶。 4、协调调节：乳糖操纵子中的I基因编码的阻遏蛋白的负调控