循环冷却水中嗜肺军团菌的鉴定、培养基与试剂.pdfVIP

GB/T XXXXX—XXXX A A 附 录 A （规范性附录） 嗜肺军团菌的鉴定 A.1 总则 嗜肺军团菌作为军团菌中重要检测对象，在特定情况下应进一步用生化培养和血清学试验鉴定嗜 肺军团菌。 A.2 生化培养法判定嗜肺军团菌 A.2.1 氧化酶试验：使用铂/铱接种环或玻璃棒，挑取待测菌落于滤纸上，加一滴氧化酶试剂，如果在 30s内出现紫红色、紫罗兰或深蓝色为阳性；2min不变色为阴性。 A.2.2 硝酸盐还原试验：将待测菌接种到硝酸盐培养基上，在36℃± 1℃培养1d～3d，加入甲液和乙液 各一滴，观察结果。立刻或数分钟内显红色为阳性，培养基颜色无变化为阴性。 注：本试验阴性的原因有三个：细菌不能还原硝酸盐；亚硝酸盐继续分解，生成氨和氮；培养基不适于细菌的生长。 如欲检查培养基中硝酸盐是否未被分解，可再加入锌粉少许，可使硝酸盐还原为亚硝酸盐而呈现红色。 A.2.3 尿素酶试验：将待检菌以较大量穿刺接种在尿素琼脂培养基上，36℃± 1℃培养2h、4h、24h，分 别观察结果，培养基变为红色为阳性,颜色不变为阴性。 A.2.4 明胶液化：将待测菌穿刺接种在明胶培养基内，于36℃± 1℃培养24h±2h,取出放置于4℃±2℃冰 箱内10min-30min后再观察结果，仍呈溶解状或表面溶解时即为明胶液化试验阳性；凝固不溶者为阴性。 A.2.5 马尿酸水解试验：挑取待测菌落，加到盛有0.4mL1%马尿酸钠的试管中制成菌悬液。混合均匀后 在36℃± 1℃水浴中温育或36℃± 1℃培养箱中培养24h。沿着试管壁缓缓加入0.2mL茚三酮溶液，在36℃± 1℃水浴中温育或36℃± 1℃培养箱中放置10min后观察结果。15min内溶液出现蓝紫色变化则为阳性；溶 液无颜色变化或15min之后出现蓝紫色变化为阴性。试验时为了避免假阴性需用标准菌株做阳性对照。 A.2.6 生化培养结果判定：氧化酶 （－/弱+），硝酸盐还原 （－），尿素酶 （－），明胶液化 （+），水解 马尿酸 （+），即可确定为嗜肺军团菌。 A.3 血清型鉴定 A.3.1 原理 当军团菌乳胶凝集试剂盒中的乳胶颗粒与含军团菌或者从相关的军团菌加热灭活的抗原的悬液混 合后，发生免疫化学反应，使乳胶颗粒迅速凝集，根据凝集结果对血清型进行初筛分类。 A.3.2 初筛 用军团菌乳胶凝集试剂盒初筛血清型，观察凝结结果，按表A.1将血清型分为Lp1单价、Lp2-14多价 和Lp species三种。 表A.1 6 GB/T XXXXX—XXXX 与species测试试剂反 与1群测试试剂反应 与2-14群测试试剂反应 结果判断 应 + - - 嗜肺军团菌血清1群 - + - 嗜肺军团菌血清2-14群 存在军团菌(或非嗜肺军团 - - +