11 DNA重组技术的基本工具.ppt

1.1DNA 重组技术的基本工具 专题 1 基因工程 福建顺昌金桥学校 吴程凯 DNA 重组技术的基本工具 “分子手术刀” 限制性核酸内切酶 DNA 连接酶 基因进入受体细胞的载体 “分子缝合针” “分子运输车” CTTCATGAATTCCGTATGGATCCTAA GAAGTACTTAAGGCATACCTAGGATT EcoR Ⅰ限制酶 酶切位点 GGCATCCTAG AATTCCGTAG CTTCATG GAAGTACTTAA BamHⅠ限制酶 酶切位点 GATCCTAA GATT “ 分子手术刀” --- 限制酶 DNA 连接酶连接的是两个脱氧核苷酸分子的什么 部位？ “分子缝合针” DNA 连接酶 CTTAA G AATTC G 磷酸二酯键 基因的载体 质粒，λ噬菌体的衍生物，动植物病毒等。 “分子运输车” 载体必须具备的条件： 3 、具有某些标记基因，便于进行筛选。（如抗菌素的 抗性基因、产物具有颜色反应的基因等） 2 、具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接； 1 、能够在宿主细胞中复制并稳定地保存； 4 、对受体细胞无害。 载体的作用： 1 、将外源基因转移到受体细胞中去。 2 、利用载体在受体细胞内对外源基因进行大量复制。 常用的载体有： 模拟 DNA 重组技术，探究载体的特点 探究一：如果条件充分，此时我们得到的目的基因 和载体是否能够成功连接？ 探究二：将多个 EcoRI 酶切后的载体与目的基因混合 后，加入 DNA 连接酶，其连接产物可能有哪些种？请 大家尝试操作。 2 、载体与载 体之间的连接 1 、目的基因与目 的基因之间的连接 4 、载体自身环化 3 、目的基因自身环化 5 、载体与目的 基因之间的连接 同向插入 反向插入 目的基因插入方向不同，将导致出现不同 的基因产物 探究活动：模拟重组 DNA 探究一：如果条件充分，此时我们得到的目的基因 和载体是否能够成功连接？ 探究二：将多个 EcoRI 酶切后的载体与目的基因混合 后，加入 DNA 连接酶，其连接产物可能有哪些种？请 大家尝试操作。 探究三：我们如何解决目的基因定向插入这个问题 呢？ 两种限制酶切割产生的黏性末端不同 载体与载体间，目 的基因与目的基因 间仍可连接 载体及目的基因 无法自身环化 得出结论：载体上含有多个酶切位点，利用双酶 切的方法，可以保证目的基因的定向插入，同时 还避免了载体及目的基因的自身环化，提高 DNA 重组率，实现目的基因的正确转录和表达。 探究四：前面操作中，载体与载体重组得到的 DNA ，载体与目的基因重组得到的 DNA 上都有标 记基因（如氨苄青霉素抗性基因），如何筛选 出含目的基因的重组 DNA 呢？