阿米洛利介导PI3K_AKT信号通路对ARDS大鼠肺损伤的影响.pdf

阿米洛利介导 PI3K/AKT 信号通路对 ARDS 大鼠肺损伤的影响 中文摘要 目的通过油酸诱导的ARDS 大鼠模型，探讨阿米洛利对急性肺损伤的影响 以及这种影响是否是通过PI3K/Akt 信号通路实现的。 方法 将96 只Wistar 雄性大鼠随机分为空白对照组、DMSO 组、ARDS 模 型组、阿米洛利干预组。建立油酸型ARDS 大鼠模型，分别于注射油酸4 h 、8 h 和12 h 时收集大鼠血清和肺泡灌洗液，称取大鼠肺组织湿重（LW ）和干重（DW ）， 计算LW/DW 比值和大鼠肺水清除率（AFC ）；采用Elisa 法检测大鼠血清和肺 泡灌洗液中uPAR 、TNF-α、IL-6 和IL-10 水平；采用HE 染色方法观察大鼠肺组 织病理学变化；采用免疫组化方法检测大鼠肺组织中VEGF 、VCAM-1 和ET-1 阳性表达水平；采用RT-PCR 法检测大鼠肺组织中uPAR 、PI3K 、Akt 和GSK 3β mRNA 表达水平；采用Western blot 检测大鼠肺组织中uPAR 、PI3K 、p-PI3K 、 Akt 、p-Akt 和GSK 3β 蛋白表达水平。 结果 （1）在注射油酸4 h 、8 h、12 h 后，与对照组比较，ARDS 大鼠LW/DW 明显增大，AFC 值明显减小；阿米洛利干预可使LW/DW 明显减小，AFC 值明 显增加；（2 ）ARDS 大鼠血清和肺泡灌洗液中uPAR 、TNF-α 和IL-6 含量明显 增加，IL-10 含量明显减少；阿米洛利干预后大鼠血清和肺泡灌洗液中uPAR 、 TNF-α 和IL-6 含量均明显减少，IL-10 含量明显增加；（3 ）ARDS 组大鼠肺组 织肺泡壁增厚，肺泡结构被破坏，炎性细胞浸润；阿米洛利干预可改善这种病理 学变化；（4 ）ARDS 组大鼠肺组织中VEGF 阳性表达明显减少，VCAM-1 和ET-1 阳性表达均明显增加，阿米洛利干预后VEGF 表达明显增加，VCAM-1 和ET-1 阳性表达均明显减少；（5 ）ARDS 大鼠肺组织中PI3K 、Akt 蛋白表达无明显变 化，uPAR 、p-PI3K 和p-Akt 和GSK 3β 表达均明显增加，阿米洛利干预后，uPAR 、 p-PI3K 、p-Akt 和GSK 3β 表达均明显减少。 结论 （1）阿米洛利对ARDS 大鼠肺损伤具有保护作用；（2 ）PI3K/Akt 信 号通路参与ARDS 大鼠肺损伤，阿米洛利通过抑制该通路改善ARDS 大鼠肺损 伤。 I 关键词：急性呼吸窘迫综合征；阿米洛利；肺损伤；炎症反应；PI3K/Akt 信号通路 II THE EFFECT OF AMILORIDE ON PI3K / AKT SIGNALING PATHWAY IN ARDS RATS WITH LUNG INJURY Abstract Purpose Through the oleic acid-induced ARDS rat model, the effect of amiloride on acute lung injury is explored and whether this effect is achieved through the PI3K / Akt signaling pathway. Methods 96 male Wistar rats were randomly divided into blank control group, DMSO group, ARDS model group, and amiloride intervention group. The ARDS rat model induced by oleic acid was established. Collect the serum and bronchoalveolar lavage fluid of rats at 4 h, 8 h and 12