蛋白质电泳试剂配制.doc

1 蛋白质电泳试剂配制 1） 2M Tris-HCl(pH=8.8) 100ml 称24.2gTris-base 加50ml ddH2O,加浓HCl至pH=8.8（约4ml），加ddH2O定容至100ml。 2） 1M Tris-HCl(pH=6.8) 100ml 称12.1gTris-base 加50ml ddH2O,加浓HCl至pH=6.8（约8ml），加ddH2O定容至100ml。 3） 10%（W/V）SDS 100ml 称SDS10g，加ddH2O定容至100ml。 4） 50%（V/V）甘油 100ml 量取50ml100%甘油，加ddH2O定容至100ml。 5） 4×分离胶缓冲液100ml（B液） 75ml 2M Tris-HCl(pH=8.8) 1.5M 4ml 10%SDS 0.4% 21ml ddH2O 4℃ 6） 4×堆积胶缓冲液100ml（C液） 50ml 1M Tris-HCl(pH=6.8) 0.5M 4ml 10%SDS 0.4% 46ml ddH2O 4℃ 7) 丙烯酰胺储存液 100ml（A液） 30%（W/V）丙烯酰胺 29.2g 0.8% 甲叉双丙烯酰胺 0.8g 加ddH2O40ml缓慢搅拌至粉末完全溶解，定容至100ml，过滤，4℃ 8） 5×样品缓冲液10ml 600ul 1M Tris-HCl(pH=6.8) 60mM 5ml 50%甘油 25% 2ml 10%SDS 2% 500ul 2-巯基乙醇（DTT） 14.4 1ml 10%溴酚兰 900ul ddH2O 4℃ 9） 10%过硫酸铵（APS） 称0.1294g ddH2O溶解，-20℃ 10）5×电泳缓冲液 Tris-base 15g 25 mM （1× 甘氨酸 94g 192 mM（1× SDS 5g 0.1% （1×） 加ddH2O至1L，pH=8.3左右，室温长期保存。 11）考马斯亮兰染色液 考马斯亮兰 R-250 1.0g 甲醇 450ml HAc 450ml ddH2O 100ml 定容过滤，室温保存。 12）1%（W/V）溴酚兰 25ml 称250.3mg溴酚兰，加ddH2O至25ml，搅拌至完全溶解，过滤除去未聚合的燃料。 13）考马斯亮兰脱色液 500ml 甲醇 50ml 冰醋酸 50ml ddH2O 400ml 室温保存。 蛋白质定量溶剂 14）BSA 1mg/ml 3ml 称取3mg用ddH2O溶解。 15）稀释染色液 250ml 浓染色液 50ml ddH2O 220ml 过滤后棕色瓶4℃ 16）实验用缓冲液 Tris-HCl 50 mM（pH=8. 2M Tris-HCl(pH=8.8) 1.25ml，稀释到50ml 蛋白质样品的定量 准备染色剂 将ddH2O与Biorod按4︰1稀释染色剂过滤，除去粉状物，棕色瓶4℃ 准备8份蛋白质标准样品比色管 吸取标准样品（终体积为100ul）分别加入干净干燥的比色管。 蛋白质电泳 分离胶10ml（8%适合分离范围30-120KDa A液 2.7ml B液 2.5ml ddH2O 4.8ml 10%Aps 50ul TEMED 5ul 灌注2块胶块，每个注入3.4ml水封，凝50min以上（37℃约30min 分离胶10ml（12%适合分离范围15-60KDa） A液 4ml B液 2.5ml ddH2O 3.5ml 10%Aps 50ul TEMED 5ul 分离胶4℃ 堆积胶（5%）4ml A液 0.67ml C液 1ml ddH2O 2.3ml 10%Aps 50ul TEMED 5ul 灌注2块胶块，每个注入1.3ml水封，凝30min以上（37℃约18min