蛋白质和酶思考题.pdfVIP

蛋白质工程和酶工程复习思考题 仅供参考 1. 培养基包括哪五大要素？ 水、碳源、氮源、无机盐、生长因子 2. 酶生物合成模式有哪几种，各有什么特点，其示意图是怎样的？ (1)同步和成型 （生长偶联型）：其生物合成伴随着细胞的生长而开始，在细胞进入旺盛生 长期时。酶大量生成，当细胞生长进入平衡期后，酶的合成随着停止。 特点：酶的生物合成可以诱导，不受分解代谢物阻遏和反应产物阻遏；当除去诱导物或细胞 进入平衡期后，酶的合成立即停止；酶所对应的mRNA 很不稳定。 (2) 延续合成型：酶的生物合成在细胞生长阶段开始，在细胞的生长进入平衡期后，酶还 可以延续合成一段较长时间 特点：酶的合成可以诱导，不受分解代谢物或产物的阻遏；酶所对应的mRNA 相当稳定， 在生长平衡期后仍可继续较长时间用于酶的合成。 （3）中期合成型：酶在细胞生长一段时间以后才开始，而在细胞生长进入平衡期后，酶的 生物合成也随着停止。 特点：酶的合成受到反馈阻遏；所对应的mRNA 不稳定。 （4）滞后合成型 （非生长偶联型）：酶在细胞生长一段时间后或者进入平衡期以后才开始 其生物合成并大量积累 特点：在对数生长期不合成酶 （可能是受到分解代谢物阻遏的影响）；所对应的mRNA 稳 定性高。 3. 凝胶电泳常用的电泳介质有哪些？ 聚丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶、淀粉凝胶、硅胶凝胶 4. 化学修饰的常见氨基酸及其侧链基团各有哪些？ 氨基(赖氨酸残基)、羧基 （谷氨酸、天冬氨酸残基）、羟基 （丝氨酸、苏氨酸残基）、巯 基 （半胱氨酸残基）、胍基 （精氨酸残基）、酚基 （酪氨酸残基）、咪唑基 （组氨酸残基）、吲 哚基 （色氨酸残基）、甲硫基 （甲硫氨酸残基） 5. 生物传感器与普通传感器的最大区别是什么？ 最大区别在于生物传感器的感受器中含有生命物质。 1 6. 在各种梯度离心中，常用的梯度介质分别有哪些？ 密度梯度离心：蔗糖溶液 （5%~60%）；等密度梯度离心：CsCl 7. Michaelis和Menton表述的酶作用的普通理论是什么？ 米氏方程。他们假定酶 （E）首先和底物 （S）结合，成为酶-底物混合物 （ES）,这是一 个较快的可逆过程。然后复合物 （ES）在下一个较慢的反应中分解成产物 （P）和游离的酶。 8. 水解酶的化学反应通式是什么？ AB+H2O AH+BOH 9. 硫酸铵分级沉淀中，饱和度如何表示？ 10. 哪种固定化方法一般不会影响底物的专一性。 物理吸附法、离子结合法、包埋法 11. 常用的外源基因的表达系统有哪些，各自优缺点是什么？ （1）大肠杆菌表达体系： 优点：遗传学和生理学背景清楚，易培养，外源基因常可高效表达 不足：不可进行典型的真核细胞所具有的翻译后修饰。 （原核表达系统的优缺点：细菌表达系统培养方法简单、增殖快、生产成本低，但缺乏 真核细胞特有的加工后处理，外源蛋白大量表达容易形成包涵体，而且在菌体中表达的外源 蛋白，在原核细胞中不稳定，易被菌体蛋白酶破坏。） （2）酵母表达系统 优点：酵母表达系统既具有原核细胞的增殖快、操作简单、成本低等优点，又可以象其他 真核细胞一样完成对蛋白质转录和翻译后的修饰。 缺点：它的蛋白水解酶类，可降解异体蛋白质，使产品产量降低。 （3）昆虫杆状病毒表达系统 优点： ①重组蛋白具有完整的生物学功能 ②能进行翻译后的加工修饰：糖基化、磷酸化、酰基化、信号肽切除及肽段的切割和分 解等 ③表达水平高：能获得重组蛋白高水平的表达，最高可使目的蛋白的量达到细胞总蛋白 的50％ ④ 能容纳大分子的插入片段 （约10kb）：杆状病毒毒粒可以扩大，并能包装大的基因片 段 ⑤同时表达多个基因 杆状病毒表达系统具有在同一细胞内同时表达多个基因的能力。表达产物可加工形成具 有活性的异源二聚体或多聚体 ⑥适合表达细胞毒性蛋白 ⑦安全 家蚕等昆虫属无脊椎动物，与人类的亲缘关系较远，且重组NPV 无多角体蛋白形成， 病毒粒子极易在自然环境中失活 不足：①非连续性表达 重组杆状病毒能导致宿主死亡 ②产物糖基化相对简单 糖侧链甘露糖成分高，缺乏复合寡糖 （4）哺乳动物细胞中的表达系统