病理检验技术 2.免疫酶组织化学技术 免疫酶组织化学技术—免疫酶组织化学技术操作准备.pptx

病理检验技术;免疫组化技术;免疫酶组织化学技术 ;免疫酶组织化学技术操作准备—步骤 一、检测标本选择 二、组织固定 三、组织石蜡切片制备 四、载玻片处理 五、组织切片 六、缓冲液的应用 七、抗原修复 八、内源性酶消除 九、内源性生物素消除 十、内源性色素消除 ;免疫酶组织化学技术操作准备—步骤 十一、实验对照设立 十二、血清封闭 十三、抗体使用 十四、显色与显色剂 十五、背景复染与复染试剂 十六、封片与封片剂 十七、染色结果的观察 ;免疫酶组织化学技术操作准备—显色机制 1.辣根过氧化物酶是一种过氧化物酶，能催化多种物质被过氧化氢氧化。DAB的显色反应是在HRP的催化下,H2O2将DAB氧化成还原型的DAB,还原型的DAB呈棕色的不溶性沉淀(图4-1)。 ;免疫酶组织化学技术操作准备—显色机制 2.碱性磷酸酶是一种水解酶,可催化水解萘酚磷酸酯释放出萘酚和重氮盐偶联而显色。固蓝/固红的显色反应是在AP的催化下,萘酚AS-MX磷酸酯被水解为萘酚,萘酚和固蓝/固红起偶联反应,在AP的活性部位形成蓝色/红色的不溶性沉淀(图4-2)。 ;免疫酶组织化学技术操作准备—显色机制 选用不同的显色剂需要配套使用不同的酶标抗体检测试剂盒,不同的显色剂可呈不同的颜色(表4-1)。免疫组化检测试剂盒标识是LSAB/HRP/ Rabbit,表示LSAB法，抗体标记酶是辣根过氧化物酶，二抗为兔免疫球蛋白，用于检测兔单抗或兔多抗的第一抗体；En Vision/AP/ Mouse则表示 En Vision法，抗体标记酶是碱性磷酸酶，二抗为鼠免疫球蛋白，用于检测鼠单抗的第一抗体。 ;免疫酶组织化学技术操作准备—显色机制 合理选用酶标抗体检测系统和显色剂，可进行多重免疫组化染色,在同一切片上清晰地显示组织细胞中多种抗原呈多种不同颜色的表达。如图4-3示DAB显色,结果呈棕色；如图4-4示AEC和固蓝显色,结果分别为红色和蓝色；如图4-5示DAB、固蓝和固红显色结果分别为棕色、蓝色和红色。