中药综合检验技术 色谱法概述 平面色谱法.ppt

（二）点样 1．样品溶液的制备 溶解样品的溶剂，尽量避免用水为溶剂。 2．点样量 点样量的多少与薄层的性能及显色剂的灵敏度有关。 3．点样方法 2. 把待分析试样的溶液滴加在薄层板的起始线上（点样），晾干 薄层板 试样 原点 　　 点样是进行TLC分离的一个最关键的步骤。上样之前薄层板最好先用溶剂展开一次，以减少所需化合物从吸附剂洗脱下来时可能混入的杂质。 样品溶解：上样前先将样品溶于少量溶剂，难挥发性溶剂可引起点样带变宽，因此最好选用挥发性溶剂(如己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、丙酮、氯仿等)， 最好用与展开剂极性相似的溶剂，应尽量使点样后溶剂能迅速挥发，以减少色斑的扩散。水溶性样品，可先用少量水使其溶解，再用甲醇或乙醇稀释定容。 点样示意图 反应混合液样 原料样 1-2cm 1cm≤点间距≤1.5cm 点样直径≤2mm 点样注意事项 a.样品的浓度应在5％～10％左右。点样带应尽可能狭窄，以获得更好的分离效果。溶解样品的溶剂要尽量避免用水，因为水溶液斑点容易扩散，且不易挥发。 b.适当的点样量，可使斑点集中，点样量过大，易拖尾或扩散；点样量过少，不易检出。点样量多少，应视薄层的性能及显色剂的灵敏度而定，此外还应考虑薄层的厚度。一般是几微克到几十微克。 c.尽量用小的点样管，如果有足够的耐性，最好只用1微升的点样管。这样，点的斑点较小，展开的色谱图分离度好，颜色分明。 （三） 展开 展开的过程就是混合物分离的过程，它必须在密闭的展开槽（多数是长方型展开槽）或直立型的单槽色谱缸或双槽色谱缸中进行。 展开方式：近水平展开 、上行展开 、多次展开 、双向展开等。 3.把点有试液的薄层板浸入到作为展开剂的流动相中（不要把试样点浸入），流动相装在加盖的层析缸中，并具有一定饱和的流动相蒸气压。 展开示意图 展开： 将点好样的薄板与流动相接触，使两相相对运动并带动样品组分迁移的过程称为展开。　　 　 一般硬板常用上行法展开。将点样后的薄板直立于已盛有展开剂的直立形层析槽的凸出处，不接触底部的展开剂，加盖饱和，再迅速将薄板置于槽底使之浸入展开剂中展开，直至展开剂上升一段距离（一般约15cm），取出薄板，用铅笔画出溶剂前沿位置。 把薄层板放入层析缸中，底端浸入适当溶剂。 注意事项： （1）色谱槽或色谱缸必须密闭良好：为使色谱槽内展开剂蒸气饱和并维持不变，应检查玻璃槽口与盖的边缘磨砂处是否严实 。 （2）注意防止边缘效应：边缘效应是指同一组分的斑点在同一薄板上出现的两边缘部分的Rf值大于中间部分的Rf值的现象。因此，在展开之前，通常将点好样的薄板置于盛有展开剂的色谱缸内饱和约一刻钟（此时薄板不得浸入展开剂中）。 （四）斑点定位 对于有色物质斑点的定位可在日光下直接观察测定。而对于无色物质斑点，则必需采用某些辅助方法使其显色。 方法如下： 荧光检出法 化学检出法 碘蒸气法、水斑点显示方法、 放射显影法等 山东中医药高等专科学校 Shandong College Of Traditional Chinese Medicine 无机与分析技术 基础化学教研室 王雷清 平面色谱法 无机与分析技术 基础化学教研室 王雷清 薄层色谱法-基本原理 薄层色谱法（TLC）： 是将固定相均匀地铺在光洁的玻璃板、金属板或塑料板的表面上形成薄板，然后在薄板上进行分离的方法。 薄层色谱法和纸色谱法与前面讨论的柱色谱法不同，它们均在平面上进行分离，因此，又被称为平面色谱法。 薄层色谱示意图 薄层色谱法的主要特点： 1．快速 2．灵敏 3．高选择性 4．简便 5．显色方便 6．应用广泛 薄层色谱示意图 一、基本原理 （一）分离原理 铺好薄层的玻璃板简称为薄板。如将含有A、B两组分的试样溶液点在薄板的一端，然后在密封的容器中（色谱槽或色谱缸）用适当的展开剂（流动相）展开。由于吸附剂对A、B两组分有着不同的吸附能力，当展开剂携带样品通过吸附剂时，A、B两组分就在吸附剂和展开剂之间不断发生吸附、解吸附（溶解）、再吸附、再解吸附。易被吸附的组分移动得慢一些，而难被吸附组分相对来说移动得快一些。经过一段时间后，A、B两组分的距离逐渐拉开，形成互相分离的两个斑点。 薄层色谱示意图 （二）比移值与相对比移值 1．比移值（Rf） 样品展开后各组分斑点在薄板上的位置可用比移值 Rf来表示。 Rf = 原点到斑点中心的距离 原点到溶剂前沿的距离 Rf值是薄层色谱法的基本