发酵过程控制技术 03-03酵母菌的死活细胞鉴别与镜检计数 子情境：活性干酵母发酵过程检验-酵母菌的死活细胞鉴别与镜检计数.ppt

子情境：活性干酵母发酵过程检验酵母菌的死活细胞鉴别与镜检计数 酵母菌的死活细胞鉴别与镜检计数 酵母菌的形态特征 一、酵母菌的个体形态 酵母菌大多数为球状、卵圆、椭圆、圆柱等单细胞，有的酵母菌子代细胞连在一起成为链状，称为假丝酵母。 1）圆形 圆球酵母 2）椭圆形 葡萄酒酵母 3）卵圆形 啤酒酵母 4）柠檬形 汉逊氏酵母 5）腊肠形 巴斯德酵母 6）假丝状 假丝酵母 二、酵母菌的大小 酵母菌长约5~20um，可达50um；宽约1~5um，可达10um以上；比细菌粗10倍左右。一般用高倍镜（40×10）观察。酵母细胞的大小与培养方式、菌龄、制片方式有关。一般成熟细胞比幼龄细胞大；菌体在液体培养基中比在固体培养基中大。 三、芽殖酵母的形态 芽殖是酵母主要的无性繁殖方式。成熟细胞长出一个小芽，到一定程度后脱离母体继续长成新个体。方式可分为多边出芽（最普遍），两端出芽和三端出芽。 酵母菌死活细胞的鉴别 一、鉴别的原理 美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈兰色，还原型无色，用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由兰色的氧化型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈兰色或淡兰色，借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。 二、鉴别的步骤 1. 染色：在干净的载玻片中央加一小滴0.1%美蓝染色液，然后再加一小滴预先稀释至适宜浓度的酵母发酵液，混匀后从侧面盖上盖玻片，并吸去多余的水分和染色液（注意染色液和菌液不宜过多或过少，并应基本等量，而且要混匀）。 2.镜检：将制好的染色片置于显微镜的载物台上，放置约3min后进行镜检，先用低倍镜，后用高倍镜进行观察，根据细胞颜色区分死细胞（蓝色）和活细胞（无色），并进行记录。 3.比较：染色约30min后再次进行观察，注意死细胞数量是否增加。 死细胞（蓝色）和活细胞（无色）， 酵母菌细胞的镜检计数 原理：主要采用显微镜直接计数法，该方法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有特定面积和容积的载玻片上(又称计菌器），于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。目前国内常用的计菌器：血细胞计数板 血球计数板的构造 四条槽构成三个平台， 中间较宽的平台被一短 横槽隔成两半。 计数室的刻度一般有两种规格 大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格 一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格 无论是哪一种规格的计数板，每一个大方格中的小方格400个，每一个大方格边长为1毫米，则每一个大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片后，盖玻片与载玻片之间的高度为0.1毫米，所以计数室的容积为0.1mm3（万分之一毫升） 计数方法 数五个中方格的总菌数，然后求得每个中方格的平均值，再乘上25或16，就得出一个大方格中的总菌数，然后再换算成毫升菌液中的总菌数。设五个中方格中总菌数A，菌液稀释倍数B，如果是25个中方格的计数板，则 1ml菌液中的总菌数=A/5×25×104×B=50000AB 同理，如果是16个中方格的计数板，则 1ml菌液中的总菌数=A/4×16×104×B=50000AB 操作步骤 ①、菌悬液的制备 ②、镜检计数室 ③、加样品： ④、显微镜计数(记录结果） ⑤、清洗血细胞计数板