环境微生物 知识点1：总大肠菌群检验 知识点1 总大肠菌群检验.pptx

;检测原理及程序;一、大肠菌群检验原理与程序;1、检验程序： 　　乳糖发酵检验 　　伊红美蓝平板分离检验 　　革兰氏染色;（1）制备培养基 　　乳糖蛋白胨培养液： 　　成分：蛋白胨10g、牛肉膏3g、乳糖5g、氯化钠5g、水1000ml，溴甲酚紫乙醇液（16g/L）1ml。 　　制法：调pH7.2~7.4后加入溴甲酚紫乙醇液，分装于装有倒管的试管中（每管10ml）。115℃20min。 　　二倍浓缩乳糖蛋白胨培养液：除水外加倍。;伊红美蓝培养基： 　　成分：蛋白胨10g、磷酸氢二钾2g、琼脂20g、水1000ml，乳糖10 g；伊红水溶液（20g/L）20ml、美蓝水溶液（5g/L）13ml。 　　制法：调pH7.2后加入乳糖，115℃20min。倒平板前加入伊红美蓝。 制备无菌生理盐水。 （2）培养皿、试管、移液管等玻璃器皿的灭菌；; 　　生活饮用水——原始水样，接种10ml到双料液中（或加1个10倍无菌生理盐水稀释液，接种1ml到单料液中）。 　　出厂自来水——原始水样接种10ml到双料液中，1ml 10倍无菌生理盐水稀释液接种到单料液中。 　　水源水——10倍无菌生理盐水递交稀释到10－3，3浓度各1ml接种到单料液中；污染严重可加大稀释度。 　　每个样品接种均为5重复。; 　　36℃培养24h。 　　产酸（变黄色）产气者报告为乳糖检验阳性，进入下一步检测。; 　取发酵液接种到伊红美蓝培养基平板（划线分离），36℃培养24h。 　具备下列大肠菌群典型菌落特征的为阳性管： 　　有核心，带金属光泽，深紫色； 　　深黑色、不带或略带金属光泽； 　　淡紫红色、中心较深。; 大肠菌群Ｇ- 或复发酵（乳糖蛋白胨培养液培养）产酸产气。; 　经过前面三个环节的检验，得到证实的各稀释度的大肠菌群阳性管数； 　查阅总大肠菌群MPN检索表，得到MPN/100ml值； 　再乘以测定3稀释度中的最小稀释倍数，报告数值； 　如果所有乳糖发酵管均为阴性，则报告未检出。;