HPLC分析方法的建立与开发幻灯片.ppt

具体做法： 第一步：在确定的色谱条件下，测定样品中待测组分(i)的峰面积或峰高，Ai(hi); 第二步：在第一步所用样品中准确加入已知量为△mi的待测组分(i)，同样条件下测出峰面积或峰高，Ai’(hi’)； 第三步：根据定量基本公式 mi=fi×Ai(hi)计算 * mi=fi×Ai(hi) （前） mi+△mi=fi’ ×Ai’(hi’) （后） mi—原样品中待测组分(i)的量 * 标准加入法的特点 ①不需另外的标准物质做内标，仅需有待测组分的纯物质 ②进样量的准确性影响不大，操作简单 ③若在样品前处理之前就加入已知准确量的待测组分，则可完全补偿待测组分在前处理过程中的损失 ④要求加入待测组分前后两次色谱测定的色谱条件完全相同，才能保证两次测定时的校正因子完全相等 * （三）影响定量分析结果准确性的因素 1、样品的制备 ★待测组分不能发生任何损失 ★干扰物和待测组分要完全分离，对于低含量的待测组分采用富集方法制备 ★避免组分浓度变化（溶剂挥发），分解、氧化或其他化学反应也会引起浓度变化 * ★要防止外界物质的污染 ★在样品制备时，要进行样品制备的条件实验，研究各种操作条件（溶解、浓缩、萃取、预分离等）对待测组分含量和形态的影响，选择最佳制备条件 * 2、进样技术 采用标准曲线法作定量分析时，进样的准确性和重复性（进样误差）将直接影响定量分析结果的误差 ★固定体积定量环（loop）的进样方式精度最好，其准确度取决于进样器的结构 ★可变体积进样的精度取决于操作者的技术，和注射器的准确度 ★自动进样方式的精确度及准确度都可达到定量环进样的水平，然而它又保留了可变体积进样的优点 * （1）气相色谱中： 气体样品：采用进样阀定体积进样，进样精度优于0.5% 采用医用注射器定体积进样，精度优于5.0% 固体样品：溶解、稀释后注射器定体积进样，精度2.0% （2）液相色谱中： 一般采用六通进样阀进样，进样精度优于0.5% * 3、色谱条件的选择 在分离度1.5的条件下，柱效的变化对采用峰面积定量的定量分析结果没有影响，而对使用峰高定量的定量分析结果有影响。 如其他因素不变，如：K‘，a，流速等，柱效增加峰面积基本不变，而峰高增加 * 液相色谱流动相的组成变化，如采用梯度洗脱时，固定相、洗脱液和待测组分之间的平衡很难保持一致，洗脱时基线也常出现漂移使峰面积、峰高测量产生误差。 * 4、检测器特性 检测器工作的稳定性和线性范围直接影响色谱定量分析结果的准确性和重复性。 5、分离度 分离度的大小直接影响峰面积和峰高的计算准确度，进而影响色谱定量分析的准确度。 * （四）定量分析的误差来源和校正方法 色谱定量分析中的每一步操作过程都会带入误差，最后定量分析结果的误差则是前面每一步误差的总合。 1、系统误差 （1）样品制备过程中待测组分的损失 溶解是否完全、浓缩和预分离时是否有挥发、萃取和沉淀是否完全等 * （2）色谱仪进样分流比、衰减比不正确或线性响应范围窄 ★进