地中海贫血基因检测和结果分析幻灯片.ppt

二、地中海贫血的致病机制 静态突变 点突变 片段突变 动态突变 碱基替换 移码突变 串联重复的三核苷酸序列随着世代的传递而拷贝数逐代累加 缺失 重复 重排 基因突变的分子机制 基因致病突变是地贫发生的分子基础 * 二、地中海贫血的致病机制 * 三、地中海贫血基因分析 1、Gap-PCR 用于α和β等缺失型地贫的检测 ψα2 ψα1 ψξ1 α2 α1 θ1 SEA 3.7 4.2 A B C D E F G 原理：普通的酶无法扩增出长距离的片段，通过设计出与缺失序列的两侧翼序列互补的引物，当存在缺失时，由于肽链靠近从而扩增出片段。 * * 三、地中海贫血基因分析 2、PCR-RDB 用于检测α和β点突变 PCR 膜条 杂交 显色 * * 三、地中海贫血基因分析 地贫基因检测的策略： α地贫：先检测常见缺失型，然后检测非缺失（点 突变），最后是未知的缺失和突变位点。 因为90% α地贫为常见的三种缺失型 （--sea,-3.7,-4.2)。 β地贫：先检测点突变，然后检测少见的缺失型。 大部分β地贫都是点突变型。 * 血红蛋白病的筛查及基因诊断的技术流程 * 遗传咨询 产前地贫携带者筛查策略 同时正常 产检对象（孕妇及其配偶） α地贫分子诊断 知情同意选择 胎儿产前基因诊断 血液五分类分析（关注MCV和MCH）+血红蛋白电泳（Hb A2) 双方某项指标 均同时降低 一方正常，另一方的指标降低 地贫全套检查 异常的一方做地贫全套检查 α-地贫特征 β-地贫特征 ID 双方均为 α-地贫特征 一方为α-地贫特征，另一方为ID或β-地贫特征 + - 单纯性ID或单纯性β-地贫 双方均为 β-地贫特征 ID或β-地贫特征的一方 做α地贫分子诊断 夫妇双方基因诊断 血R正常的 一方做α地 贫分子诊断 - 单纯性ID或单纯性β-地贫 - + + 仅异常血红蛋白 必要时测序或选择其中一种地贫检测 * 四、必威体育精装版的地中海贫血检测方法 1、融链曲线分析法 用于检测α或β缺失和点突变 Thongperm, et al. Journal of Molecular Diagnostics .2010 Xiong F, et al. J Mol Diagn. 2011 Christina V，et al. Clinical Chemistry. 2003 原理：根据每条肽链都有自己的Tm值，从而可以通过温度差来判断 * 四、必威体育精装版的地中海贫血检测方法 2、MLPA（多重连接探针扩增） 用于寻找未知缺失断裂点 Xiao-Feng Wei，et al. Ann Hematol. 2011 * 四、必威体育精装版的地中海贫血检测方法 3、毛细管电泳 可以检测α非缺失CS（Hb CS)和 βE地贫 Hb A Hb E Hb A2 Can Liao, et al. European Journal of Haematology. 2010 * 四、必威体育精装版的地中海贫血检测方法 4、DHPLC（变性高效液相色谱） 用于缺失型和突变型地贫都可以 李倩，南方医科大学论文，2010 *