呼吸道病原体检测幻灯片.ppt

方法的局限性 在嗜肺军团菌和Q热立克次体中，有时血清会含有与卵抗原反应的抗体，所以使用卵黄囊固定抗原会出现非特异性荧光。当出现这种情况时，该血清就不能用IFA进行分析了 * 临床实际效果图 * * 九联检 * * * * * * 思考题 质控孔的作用是什么？ * * 抗原检测采样 * 采样 抗体检测 * 采样对结果影响较大 非典型感染多为干咳，无痰/少痰 阳性率低（标本问题，病毒颗粒小） 抗原在体内存在时间短 抗原检测的劣势 * 九项呼吸道感染病原体IgM抗体检测 * 检测原理 间接免疫荧光法（IFA）是基于待测样本中的抗体与吸附在载玻片上的抗原发生的反应。样本中存在的特异性抗体和抗原反应，未与抗原结合的免疫球蛋白在洗涤步骤中除去。在下一步骤中，抗原-抗体复合物与荧光素标记的抗人球蛋白反应，用免疫荧光显微镜观察结果 * 试剂盒组成 组分 成分和用途 载玻片 检测的物理载体，覆有聚四氟乙烯并包被有针对检测物的特异性抗原， 质控品 吸附剂 羊抗人IgG用来吸附人IgG避免干扰IgM 检测 FITC结合物 荧光素标记的抗人免疫球蛋白结合物，和抗原抗体复合物反应，并显色 封闭介质 甘油缓冲液，便于观察 磷酸盐缓冲液(PBS) 用于洗涤步骤，从反应介质中除去未结合的免疫球蛋白和结合物 * 实验步骤1 样本的稀释：血清标本与PBS按1:1比例稀释 稀释后的血清加入吸附剂中，彻底混匀。处理后的血清要离心10-15分钟除去沉淀，以防干扰检测 * 实验步骤2 * 结果判断 * 阴性结果荧光图谱 军团菌、肺炎衣原体和立克次体无荧光；支原体、腺病毒、甲型和乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的细胞呈现红色 * 阳性结果荧光图谱 腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒或副流感病毒对阳性血清的1-15%细胞的细胞核、胞浆或胞膜出现苹果绿色荧光；军团菌、衣原体或立克次体中所有的细菌呈现出苹果绿色荧光；支原体对阳性血清在细胞外围呈现苹果绿色荧光 * 病原体 形态或荧光模式 嗜肺军团菌 杆状 肺炎支原体 细胞外围荧光模式 立克次体 球杆状 肺炎衣原体 球状 腺病毒 混合荧光模式（细胞核和胞浆或胞膜） 呼吸道合胞病毒 混合荧光模式（细胞核和胞浆或胞膜） 甲型流感病毒 混合荧光模式（细胞核和胞浆或胞膜） 乙型流感病毒 混合荧光模式（细胞核和胞浆或胞膜） 副流感病毒 混合荧光模式（细胞核和胞浆或胞膜） *