流式细胞术免疫标记简介(完整)幻灯片.ppt

3.髓系标记 从髓系祖细胞→终末分化的成熟细胞（粒细胞、单核细胞、血小板和红细胞）间各阶段细胞特征性标志还不十分清楚。 根据粒细胞和单核细胞上的髓系抗原表达试将其大致分为七种类型 : （1）粒细胞和单核细胞上都有较强表达的抗原有：CD13、CDw17、CD32、CD87、CD88、CD89、CDw92、CD93、CD156、CD157、CD163。其中CD13在原粒细胞质中表达比膜上早，在AML诊断上十分重要。 （2）以粒细胞为主，但也存在于单核细胞的抗原有：CD15和CD65。CD65是特异性髓系抗原，强表达在成熟粒细胞，弱表达在单核细胞上。 （3）基本表达在粒细胞上的抗原有：CD16b和CD66。 * （4）以单核细胞为主，但也表达在粒细胞的抗原有：CD14和CD33。CD14主要强表达在单核-巨噬细胞，弱表达在粒细胞上。CD33抗原分布只限于造血系统内，表达在髓系祖细胞CFU-GEMM、CFU-GM、CFU-G、CFU-M以及相应的白血病细胞上。 （5）基本只表达在单核细胞上的抗原有：CD16、CD64、CD68、CD91、CDw136和CD65。CD68是目前发现可靠的检测造血系统内单核-巨噬细胞系统的特异标志。 * （6）造血干、祖细胞抗原有：CD34和CD90。CD34除表达在早期造血干、祖细胞外，还表达在约40%的AML和60%的ALL上 （7）其他髓系相关抗原：这些抗原主要存在于其他系细胞上，但在某些髓系细胞上也有表达，如：CD4、CD7、CD9、CD10、CD11b、CD11c、CD31、CD36、CD38等。 * 巨核细胞系 在巨核细胞系发育过程中依次出现PPO、CD41a（Ⅱb/Ⅲa）、CD41b（Ⅱb）和CD61（Ⅲa）、CD42（Ⅰb）。还可表达CD36（强）。 正常情况下血小板处于静止状态。目前研制出的抗血小板单抗如CD9、CDw17、CD31、CD36、CD41a、CD41b、CD42a、 CD42b、CD61，主要都针对静止的血小板。 当血小板被激活时，血小板中颗粒内容物释放，整合到活化的血小板质膜内，成为一些激活抗原，如CD62 （P-选择素）、CD63及CD107a和CD107b。 红细胞系 血型糖蛋白A、H。 * 流式细胞术免疫荧光标记抗体的选择 有特异性标志：选择一种即可，如CD3标记总T细胞； 没有明显的特异性标志：可以采用不同抗体组合，标记某种细胞。如Treg细胞公认的标志为CD4+CD25+FoxP3+. 表面分子标记可以与胞内分子标记相结合； 免疫荧光标记也可以与其它的标记方法相结合：如与CFSE 进行不同细胞亚群增殖分析。 * * 流式细胞术表面分子免疫标记操作举例 淋巴细胞亚群检测操作程序 一、实验原理： 人的淋巴细胞根据其生物功能和细胞表面抗原的表达可分为三大类：T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK自然杀伤细胞。T淋巴细胞表达CD3；B淋巴细胞表达CD19；NK自然杀伤细胞表达CD56或CD16，并且不表达CD3。利用各种单克隆抗体与淋巴细胞表面抗原结合，再配多色荧光染料，即可以把淋巴细胞区分为各种亚型。进面得到各亚群的比例。 * 二、主要试剂： MultiTEST IMK Kit(美国BD Biosciences公司；CAT:340503)， 其中包括：1、CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PreCP/CD4-APC 2、CD3-FITC/CD16+56-PE/CD45-PreCP/CD19-APC 3、FACSLysing Solution 三、实验操作： 1、标本采集：使用EDTA-K2抗凝真空采血管，抽取静脉血2ml。 2、染色和固定细胞： 标本管编号A，取两只流式专用管A1、A2。 A1管加入CD3-FITC/CD16+56-PE/CD45-PreCP/CD19-APC 20uL； A2管加入CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PreCP/CD4-APC 20Ul。 A1、A2管中